I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
После многолетней борьбы с алкогольной зависимостью, я обратился к магу Роману Петровичу на сайте nfkts545.ru. Его заговор от пьянства принес мне невероятное облегчение. Я почувствовал, как тяжесть ушла, и теперь могу радоваться жизни без опасения вернуться к прежним привычкам. Благодаря магии Романа Петровича я снова контролирую свою жизнь.
Обратиться к настоящему магу можно здесь https://nfkts545.ru
-молитвы и заговоры от алкоголизма и пьянства
-заговор на спящего мужа от пьянства
-заговор сына от алкоголизма
-лечение алкоголизм заговоры
-https://nfkts545.ru - настоящий маг
-заговор от пьянства и его последствия на мужа читать в домашних
-заговор от запоя на воду
-заговор от пьянства как читать правильно
-заговор на алкоголь от пьянства
-какие нибудь заговоры от пьянства
Сильный приворот в Тольятти - приворот на убывающую луну форум
(Josephbyday, 5. 4. 2024 14:00)
Приворот мужчины в Тольятти
Обращался через сайт https://nfkts545.ru к магу Роману Петровичу с просьбой о ритуале приворота, и не могу не отметить его профессионализм и индивидуальный подход к клиенту. Результаты превзошли все мои ожидания - моя возлюбленная начала проявлять ко мне гораздо больше внимания и заботы. Благодарю мага Романа Петровича за его работу и рекомендую его всем, кто нуждается в помощи.
-Приворот мужчины в Тольятти
-Приворот женщины в Тольятти
-Любовный приворот в Тольятти
-сайт деревенского мага https://nfkts545.ru у него делала приворот
-заговор перед сном на любовь парня
MDMA (МДМА) Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить MDMA (МДМА) Москва - COCAINE24.BIZ
(Lewisuhatox, 5. 4. 2024 8:38)
MDMA (МДМА) Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить MDMA (МДМА) Москва - COCAINE24.BIZ
.
Для заказа MDMA (МДМА) а в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Купить в Москве MDMA (МДМА) закладкой 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Заказать MDMA (МДМА) в Москве доставкой САЙТ - https://cocaine24.biz/
Покупка в руки MDMA (МДМА) а в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Лучший MDMA (МДМА) в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
Качественный MDMA (МДМА) в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В МОСКВЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Мне нужно Купить MDMA (МДМА) в Москве? Какие цены на MDMA (МДМА) в Москве? Каким образом можно Купить MDMA (МДМА) в Москве? Какие сейчас цены на MDMA (МДМА) в Москве?
Кто сейчас продает MDMA (МДМА) в Москве? Как много завезли MDMA (МДМА) а в Москве? MDMA (МДМА) в Москве купить без йода абсолютно без вреда для организма?
Царь-MDMA (МДМА) это название того MDMA (МДМА) а который продают на официальном доверенном сайте гаранте? Украсть такой MDMA (МДМА) в Москве не получиться, потому что работают профессионалы?
Какие бывают разновидности MDMA (МДМА) а сейчас в Москве и почему у нас он самый лучший MDMA (МДМА) в Москве? Если взять много MDMA (МДМА) а в Москве а заплатить за него мало, такое Возможно?
Новые правила покупки и доставки MDMA (МДМА) а в Москве уже действуют? Круглосуточная покупка MDMA (МДМА) а в Москве только на официальном сайте по ссылке, больше нигде?
Кристаллы MDMA (МДМА) а в Москве уже сравнивают с градом? Шыкарное качество MDMA (МДМА) а в Москве никогда никого не оставит равнодушным или безразличны?
Моментальная покупка MDMA (МДМА) а в Москве и круглосуточная потдержка MDMA (МДМА) а в Москве всегда на связи, даже в выходные и праздничные дни?
Щедрость насыпи в закладках MDMA (МДМА) а в Москве иногда даже удивляет, потому что закладки MDMA (МДМА) а в Москве всегда на 10% больше чем в заказе?
Занять деньги или занять дорожку такого MDMA (МДМА) а в Москве это не стыдно, это жизнь которой живут постоянно люди в Москве?
Хорошо что Вы всегда на связи - самый частый отзыв про наш MDMA (МДМА) в Москве за последние пять лет работы на рынке MDMA (МДМА) а в Москве!
Финальная версия разработок всех рецептов MDMA (МДМА) а в Москве можно купить на нашем сайте уже не первый год? Улететь в Небеса сквозь все преграды можно только с нашим MDMA (МДМА) ом в Москве!
Единственный Магазин в Москве который реально безопасно доставляет товар в руки не важно какого количества, Это именно наш Сайт MDMA (МДМА) а в Москве! Наш MDMA (МДМА) в Москве знаю Все!
.
.
.
МОСКВА-РОССИЯ-MDMA (МДМА) -ЗАКЛАДКИ-ДОСТАВКА В РУКИ -ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО -ЛЮБОЙ РАЙОН - ПОДМОСКОВЬЕ ТОЖЕ ЕСТЬ - РОССИЯ
.
.
.
Конец тегов
Кокаин (КОКС) Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Кокаин (КОКС) Москва - COCAINE24.BIZ
(BobbyeriToivy, 5. 4. 2024 8:16)
Кокаин (КОКС) Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Кокаин (КОКС) Москва - COCAINE24.BIZ
.
Для заказа Кокаин (КОКС) а в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Купить в Москве Кокаин (КОКС) закладкой 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Заказать Кокаин (КОКС) в Москве доставкой САЙТ - https://cocaine24.biz/
Покупка в руки Кокаин (КОКС) а в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Лучший Кокаин (КОКС) в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
Качественный Кокаин (КОКС) в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В МОСКВЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Мне нужно Купить Кокаин (КОКС) в Москве? Какие цены на Кокаин (КОКС) в Москве? Каким образом можно Купить Кокаин (КОКС) в Москве? Какие сейчас цены на Кокаин (КОКС) в Москве?
Кто сейчас продает Кокаин (КОКС) в Москве? Как много завезли Кокаин (КОКС) а в Москве? Кокаин (КОКС) в Москве купить без йода абсолютно без вреда для организма?
Царь-Кокаин (КОКС) это название того Кокаин (КОКС) а который продают на официальном доверенном сайте гаранте? Украсть такой Кокаин (КОКС) в Москве не получиться, потому что работают профессионалы?
Какие бывают разновидности Кокаин (КОКС) а сейчас в Москве и почему у нас он самый лучший Кокаин (КОКС) в Москве? Если взять много Кокаин (КОКС) а в Москве а заплатить за него мало, такое Возможно?
Новые правила покупки и доставки Кокаин (КОКС) а в Москве уже действуют? Круглосуточная покупка Кокаин (КОКС) а в Москве только на официальном сайте по ссылке, больше нигде?
Кристаллы Кокаин (КОКС) а в Москве уже сравнивают с градом? Шыкарное качество Кокаин (КОКС) а в Москве никогда никого не оставит равнодушным или безразличны?
Моментальная покупка Кокаин (КОКС) а в Москве и круглосуточная потдержка Кокаин (КОКС) а в Москве всегда на связи, даже в выходные и праздничные дни?
Щедрость насыпи в закладках Кокаин (КОКС) а в Москве иногда даже удивляет, потому что закладки Кокаин (КОКС) а в Москве всегда на 10% больше чем в заказе?
Занять деньги или занять дорожку такого Кокаин (КОКС) а в Москве это не стыдно, это жизнь которой живут постоянно люди в Москве?
Хорошо что Вы всегда на связи - самый частый отзыв про наш Кокаин (КОКС) в Москве за последние пять лет работы на рынке Кокаин (КОКС) а в Москве!
Финальная версия разработок всех рецептов Кокаин (КОКС) а в Москве можно купить на нашем сайте уже не первый год? Улететь в Небеса сквозь все преграды можно только с нашим Кокаин (КОКС) ом в Москве!
Единственный Магазин в Москве который реально безопасно доставляет товар в руки не важно какого количества, Это именно наш Сайт Кокаин (КОКС) а в Москве! Наш Кокаин (КОКС) в Москве знаю Все!
.
.
.
МОСКВА-РОССИЯ-Кокаин (КОКС) -ЗАКЛАДКИ-ДОСТАВКА В РУКИ -ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО -ЛЮБОЙ РАЙОН - ПОДМОСКОВЬЕ ТОЖЕ ЕСТЬ - РОССИЯ
.
.
.
Конец тегов
Альфа ПВП (A-PVP) Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Альфа ПВП (A-PVP) Москва - COCAINE24.BIZ
(ThomasovKig, 5. 4. 2024 6:26)
Альфа ПВП (A-PVP) Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Альфа ПВП (A-PVP) Москва - COCAINE24.BIZ
.
Для заказа Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Купить в Москве Альфа ПВП (A-PVP) закладкой 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Заказать Альфа ПВП (A-PVP) в Москве доставкой САЙТ - https://cocaine24.biz/
Покупка в руки Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Лучший Альфа ПВП (A-PVP) в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
Качественный Альфа ПВП (A-PVP) в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В МОСКВЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Мне нужно Купить Альфа ПВП (A-PVP) в Москве? Какие цены на Альфа ПВП (A-PVP) в Москве? Каким образом можно Купить Альфа ПВП (A-PVP) в Москве? Какие сейчас цены на Альфа ПВП (A-PVP) в Москве?
Кто сейчас продает Альфа ПВП (A-PVP) в Москве? Как много завезли Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве? Альфа ПВП (A-PVP) в Москве купить без йода абсолютно без вреда для организма?
Царь-Альфа ПВП (A-PVP) это название того Альфа ПВП (A-PVP)а который продают на официальном доверенном сайте гаранте? Украсть такой Альфа ПВП (A-PVP) в Москве не получиться, потому что работают профессионалы?
Какие бывают разновидности Альфа ПВП (A-PVP)а сейчас в Москве и почему у нас он самый лучший Альфа ПВП (A-PVP) в Москве? Если взять много Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве а заплатить за него мало, такое Возможно?
Новые правила покупки и доставки Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве уже действуют? Круглосуточная покупка Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве только на официальном сайте по ссылке, больше нигде?
Кристаллы Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве уже сравнивают с градом? Шыкарное качество Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве никогда никого не оставит равнодушным или безразличны?
Моментальная покупка Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве и круглосуточная потдержка Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве всегда на связи, даже в выходные и праздничные дни?
Щедрость насыпи в закладках Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве иногда даже удивляет, потому что закладки Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве всегда на 10% больше чем в заказе?
Занять деньги или занять дорожку такого Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве это не стыдно, это жизнь которой живут постоянно люди в Москве?
Хорошо что Вы всегда на связи - самый частый отзыв про наш Альфа ПВП (A-PVP) в Москве за последние пять лет работы на рынке Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве!
Финальная версия разработок всех рецептов Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве можно купить на нашем сайте уже не первый год? Улететь в Небеса сквозь все преграды можно только с нашим Альфа ПВП (A-PVP)ом в Москве!
Единственный Магазин в Москве который реально безопасно доставляет товар в руки не важно какого количества, Это именно наш Сайт Альфа ПВП (A-PVP)а в Москве! Наш Альфа ПВП (A-PVP) в Москве знаю Все!
.
.
.
МОСКВА-РОССИЯ-Альфа ПВП (A-PVP)-ЗАКЛАДКИ-ДОСТАВКА В РУКИ -ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО -ЛЮБОЙ РАЙОН - ПОДМОСКОВЬЕ ТОЖЕ ЕСТЬ - РОССИЯ
.
.
.
Конец тегов
Мефедрон Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Мефедрон Москва - COCAINE24.BIZ
(Charlessmaymn, 5. 4. 2024 6:25)
Мефедрон Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Мефедрон Москва - COCAINE24.BIZ
.
Для заказа Мефедрона в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Купить в Москве Мефедрон закладкой 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Заказать Мефедрон в Москве доставкой САЙТ - https://cocaine24.biz/
Покупка в руки Мефедрона в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Лучший Мефедрон в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
Качественный Мефедрон в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В МОСКВЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Мне нужно Купить Мефедрон в Москве? Какие цены на Мефедрон в Москве? Каким образом можно Купить Мефедрон в Москве? Какие сейчас цены на Мефедрон в Москве?
Кто сейчас продает Мефедрон в Москве? Как много завезли Мефедрона в Москве? Мефедрон в Москве купить без йода абсолютно без вреда для организма?
Царь-Мефедрон это название того Мефедрона который продают на официальном доверенном сайте гаранте? Украсть такой Мефедрон в Москве не получиться, потому что работают профессионалы?
Какие бывают разновидности Мефедрона сейчас в Москве и почему у нас он самый лучший Мефедрон в Москве? Если взять много Мефедрона в Москве а заплатить за него мало, такое Возможно?
Новые правила покупки и доставки Мефедрона в Москве уже действуют? Круглосуточная покупка Мефедрона в Москве только на официальном сайте по ссылке, больше нигде?
Кристаллы Мефедрона в Москве уже сравнивают с градом? Шыкарное качество Мефедрона в Москве никогда никого не оставит равнодушным или безразличны?
Моментальная покупка Мефедрона в Москве и круглосуточная потдержка Мефедрона в Москве всегда на связи, даже в выходные и праздничные дни?
Щедрость насыпи в закладках Мефедрона в Москве иногда даже удивляет, потому что закладки Мефедрона в Москве всегда на 10% больше чем в заказе?
Занять деньги или занять дорожку такого Мефедрона в Москве это не стыдно, это жизнь которой живут постоянно люди в Москве?
Хорошо что Вы всегда на связи - самый частый отзыв про наш Мефедрон в Москве за последние пять лет работы на рынке Мефедрона в Москве!
Финальная версия разработок всех рецептов Мефедрона в Москве можно купить на нашем сайте уже не первый год? Улететь в Небеса сквозь все преграды можно только с нашим Мефедроном в Москве!
Единственный Магазин в Москве который реально безопасно доставляет товар в руки не важно какого количества, Это именно наш Сайт Мефедрона в Москве! Наш Мефедрон в Москве знаю Все!
.
.
.
МОСКВА-РОССИЯ-МЕФЕДРОН-ЗАКЛАДКИ-ДОСТАВКА В РУКИ -ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО -ЛЮБОЙ РАЙОН - ПОДМОСКОВЬЕ ТОЖЕ ЕСТЬ - РОССИЯ
.
.
.
Конец тегов
Гашиш Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Гашиш Москва - COCAINE24.BIZ
(Keithustfah, 5. 4. 2024 5:50)
Гашиш Москва? Сайт - COCAINE24.BIZ Купить Гашиш Москва - COCAINE24.BIZ
.
Для заказа Гашиша в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Купить в Москве Гашиш закладкой 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Заказать Гашиш в Москве доставкой САЙТ - https://cocaine24.biz/
Покупка в руки Гашиша в Москве 24/7 САЙТ - https://cocaine24.biz/
Лучший Гашиш в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
Качественный Гашиш в Москве САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
ДЛЯ ЗАКАЗА ТОВАРА В МОСКВЕ НУЖНО НАПИСАТЬ НА САЙТ - https://cocaine24.biz/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги для гугла - Мне нужно Купить Гашиш в Москве? Какие цены на Гашиш в Москве? Каким образом можно Купить Гашиш в Москве? Какие сейчас цены на Гашиш в Москве?
Кто сейчас продает Гашиш в Москве? Как много завезли Гашиша в Москве? Гашиш в Москве купить без йода абсолютно без вреда для организма?
Царь-Гашиш это название того Гашиша который продают на официальном доверенном сайте гаранте? Украсть такой Гашиш в Москве не получиться, потому что работают профессионалы?
Какие бывают разновидности Гашиша сейчас в Москве и почему у нас он самый лучший Гашиш в Москве? Если взять много Гашиша в Москве а заплатить за него мало, такое Возможно?
Новые правила покупки и доставки Гашиша в Москве уже действуют? Круглосуточная покупка Гашиша в Москве только на официальном сайте по ссылке, больше нигде?
Кристаллы Гашиша в Москве уже сравнивают с градом? Шыкарное качество Гашиша в Москве никогда никого не оставит равнодушным или безразличны?
Моментальная покупка Гашиша в Москве и круглосуточная потдержка Гашиша в Москве всегда на связи, даже в выходные и праздничные дни?
Щедрость насыпи в закладках Гашиша в Москве иногда даже удивляет, потому что закладки Гашиша в Москве всегда на 10% больше чем в заказе?
Занять деньги или занять дорожку такого Гашиша в Москве это не стыдно, это жизнь которой живут постоянно люди в Москве?
Хорошо что Вы всегда на связи - самый частый отзыв про наш Гашиш в Москве за последние пять лет работы на рынке Гашиша в Москве!
Финальная версия разработок всех рецептов Гашиша в Москве можно купить на нашем сайте уже не первый год? Улететь в Небеса сквозь все преграды можно только с нашим Гашишом в Москве!
Единственный Магазин в Москве который реально безопасно доставляет товар в руки не важно какого количества, Это именно наш Сайт Гашиша в Москве! Наш Гашиш в Москве знаю Все!
.
.
.
МОСКВА-РОССИЯ-Гашиш-ЗАКЛАДКИ-ДОСТАВКА В РУКИ -ГАРАНТИИ - КУПИТЬ - КРУГЛОСУТОЧНО -ЛЮБОЙ РАЙОН - ПОДМОСКОВЬЕ ТОЖЕ ЕСТЬ - РОССИЯ
.
.
.
Конец тегов
Considerations To Know About Black Diamond Ring
(HaroldVek, 4. 4. 2024 16:54)
Watch ring Pear diamond solitaire engagement ring with fern element and star established diamonds in 18K rose gold
"This is quite top quality ring, it is gorgeous, it is precisely as described, it satisfied my expectation and then some, I'd a issue with shipping and delivery and he took treatment of it instantly.
Be the 1st to learn about interesting new designs, Particular occasions, retail store openings and much more. E mail
Selected kinds determine the overall silhouette and effect of the engagement ring, so consider time to think about if a solitaire, pavé, halo, or trilogy design will be the 1 for you personally. Ideal known for their brightness and brilliance, a round diamond is usually a time-honoured diamond shape for an engagement ring as its flexible round shape suits all styles and metals. Our designers attract creative inspiration from around to bring you a various range of platinum round diamond engagement rings, so take a look at our full choice of design variations beneath.
Normally a round fantastic Lower diamond might be dearer than an emerald Reduce because of the popularity and need of rounds as well as the amount of in the tough diamond is squandered during the slicing approach (about 40%).
This pendant is accessible in numerous unique full carat weights of side diamonds in addition to unique Middle stone measurements the pendant can maintain. Click on this link to view other variations obtainable for this pendant.
Similar to the love of your life, there is a diamond intended just for you. Regardless of whether purely natural or lab grown, meet up with yours in our unmatched curation of diamond rings for Females and Males.
https://vocal.media/authors/sanders-haas
Colour Options of Sapphire Engagement Rings The attraction of sapphire lies not only in its Affiliation While using the royalty as well as the aristocrats and also in its availability in many different shades. This magnificent gemstone is available in almost every shade of the rainbow from white to black covering the complete coloration wheel.
Scroll by means of to determine Each and every season’s drool-worthy sparklers, mainly because diamonds are permanently — whether or not not all couples are:
In regards to metals, you are able to choose from white, yellow and rose gold and silver and platinum. Want one thing unique and fashionable? We even have two-tone gold engagement rings for Gals.
Personalised promoting could be thought of a “sale” or “sharing” of information under California along with other state privateness rules, and you could have a suitable to opt out.
The worth for a wonderful Lower emerald cut diamond will probably change depending on the carat pounds, clarity quality and coloration quality.
Pricing is decided by real Expense and working expenses. Through the years We've got constructed interactions with the top diamond suppliers to secure the ideal choice and pricing. Adiamor believes in passing People price savings on to our customers. This tactic has labored for more than 20 years and we intend to continue offering premium luxurious items at the top price ranges within the sector. Shop Diamonds Exactly what is the differance involving platinum or white gold?
A 3-carat round diamond ring exudes luxury and extravagance, having a putting existence that highlights the Excellent brilliance from the round cut. Selecting this size requires a mindful assessment of components including color, clarity, and Slice to ensure that it complements the grandeur of your like Tale.
Bases for Xrumer
(Jamenvom, 4. 4. 2024 13:04)Premium базы для Xrumer 23 ai Strong и GSA Search Engine Ranker. https://dseo24.monster
The best secure smartphones
(MarianFip, 4. 4. 2024 8:44)The best secure smartphones in 2024 - https://birka-online.com/
Best Online Slot Games
(NathanSpady, 4. 4. 2024 8:31)
Best online casinos in the US of 2024. We compare online casinos, bonuses & casino games so that you can play at the best casino online in the USA
https://is.gd/u5Hkob
Check out the best new casino sites for 2024 that are ranked according to their casino game variety, bonus ease, safety, and overall user experience
https://is.gd/u5Hkob
Sports forecast channel, everything is the same as others, only free https://tinyurl.com/yptttbz5
casino table games
(MeganTaf, 3. 4. 2024 16:01)
blackjack online casino
best casino online
Bases for Xrumer
(Jamenvom, 3. 4. 2024 13:28)Premium базы для Xrumer 23 ai Strong и GSA Search Engine Ranker. https://dseo24.monster
шофиране в тайланд отляво или отдясно
(Sownjqr, 2. 4. 2024 22:22)
У вас есть среди лучших сайтов. Посетите также мою страничку
взгляните также мою страничку и дайте ей оценку
https://anotepad.com/note/read/f5x7de7a екскурзия пукет ангкор ват
https://anotepad.com/note/read/tr9dcarj почивка остров пукет all inclusive
https://transcribe.frick.org/wiki/%d0%9d%d0%b0%d0%b9-%d0%b4%d0%be%d0%b1%d1%80%d0%b8%d1%82%d0%b5_%d0%a1%d1%8a%d0%b2%d0%b5%d1%82%d0%b8_%d0%97%d0%b0_%d0%9f%d0%be%d1%81%d0%b5%d1%89%d0%b5%d0%bd%d0%b8%d0%b5_%d0%92_%d0%9f%d1%83%d0%ba%d0%b5%d1%82 точно време в пукет
https://fredricspivey8.bravesites.com/entries/general/%d0%9e%d1%82-%d0%bd%d0%be%d1%81%d0%b0-%d1%81%d0%b5-%d0%be%d1%82%d0%ba%d1%80%d0%b8%d0%b2%d0%b0-%d0%bf%d1%80%d0%b5%d0%ba%d1%80%d0%b0%d1%81%d0%bd%d0%b0-%d0%bf%d0%b0%d0%bd%d0%be%d1%80%d0%b0%d0%bc%d0%b0-%d0%ba%d1%8a%d0%bc-%d0%be%d1%81%d1%82%d1%80%d0%be%d0%b2%d0%b8%d1%82%d0%b5 най доброто време за посещение на пукет
=pat=
naléhavě sem přijďte číst důležité zprávy https://aitt.md/en/
(MichaelSit, 2. 4. 2024 1:46)naléhavě sem přijďte číst důležité zprávy https://aitt.md/en/
Exploring the Magic of Dating: Connections, Broadening, and Discovery
(Cyharlesspuse, 1. 4. 2024 23:16)
Dating is a junket that encompasses the spell of good samaritan ally, slighting excrescence, and exciting discoveries. It is a take care of through which individuals traverse dreamt-up possibilities, getting to recall each other on a deeper level. Dating allows people to share experiences, market ideas, and design expressive connections.
https://hentai0day.com/videos/23095/love-bitch-hentai-uncensored-porn/
In the duchy of dating, undivided encounters a distinctive range of emotions. There's the exhilaration of convention someone modish, the anticipation of a first fixture, and the titillation of discovering common interests and shared values. It is a time of vulnerability and self-discovery as individuals open themselves up to the plausibility of inclination and companionship.
https://thetranny.com/videos/64566/cute-young-shemale/
Effective communication lies at the will of dating, facilitating understanding and appropriateness between two people. It involves active listening, honest symbol, and empathy, creating a range representing authentic dialogue. Thoroughly communication, individuals can tour their compatibility, transfer thoughts and dreams, and build a bottom of trust.
Men Dating Men: Celebrating Harmony and Pull
(Albertanodo, 1. 4. 2024 21:12)
Men dating men sample love, union, and the beauty of relationships in their own unique way.
https://zeenite.com/videos/136973/boruto-hanabi-hyuga-deep-creampie-hentai/
In a life that embraces diversity and inclusivity, same-sex relationships suffer with develop their place. Men who date men sail the joys and challenges of structure meaningful connections based on authenticity and complementary understanding. They celebrate charity while overcoming societal expectations, stereotypes, and discrimination.
https://gay0day.com/search/luke-wilder-mansurfer/
Communication and emotional intimacy pleasure a momentous part in their relationships, fostering trust and deepening their bond. As people progresses close to conformity, it is noted to acknowledge and compliments the friendship shared between men dating men, embracing their unequalled experiences and contributions to the tapestry of kind-hearted connections.
interesting for a very long time
(Esbesnase, 1. 4. 2024 16:12)Thanks, I've been looking for this for a long time
Wo kann ich kostenlose Kryptowährung erhalten?
(Waynejek, 1. 4. 2024 14:52)
Melden Sie sich an, um ein Willkommenspaket im Wert von 1.000 USDT zu erhalten!
Kaufen Sie Kryptowährungen https://www.bitget.com/de
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
заговор на убывающую луну от пьянства отзывы nfkts545.ru - заговор от алкоголизма на воск
(Jamesrunda, 6. 4. 2024 4:28)