I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Где Купить Амфетамин? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Амфетамин? САЙТ - KOKS24.CC
КАК КУПИТЬ АМФЕТАМИН НА САЙТЕ - https://koks24.cc/
КАК ЗАКАЗАТЬ ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
ГДЕ ДОСТАВКА АМФЕТАМИНА В РУКИ - https://koks24.cc/
ГДЕ ЗАКЛАДКА АМФЕТАМИНА ОНЛАЙН - https://koks24.cc/
ТУТ ССЫЛКА В ТЕЛЕГРАММ - https://koks24.cc/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Где Купить Амфетамин В Москве и Питере"
Где Купить Амфетамин в Москве и Питере?
Как Купить закладку Амфетамин в Москве и Питере?
Цена на Амфетамин в Москве и Питере?
Купить Амфетамин с Доставкой в руки в Москве и Питере?
Сколько Стоит Амфетамин в Москве и Питере?
Почему так просто Купить Амфетамин закладкой в Москвеи Питере?
Гарантия на Амфетамин в Москвеи Питере?
Купить Амфетамин с Гарантией?
Круглосуточные магазины Амфетамин в Москве и Питере?
Оптовые и Розничные продажи Амфетамин в Москве и Питере?
Купить Амфетамин в Москве и Питере через Телеграмм?
Лучший Амфетамин Купить в Москве и Питере?
Купить Амфетамин в Москве и Питере по скидке и хорошей цене?
Купить Амфетамин в Москве и Питере через свой телефон или ноутбук можно легко?
Сколько где Амфетамин стоит цена?
Как купить Амфетамин в Москве и Питере если нет очень много денег и нужно угостить девушку?
С кем можно разделить грамм Амфетамин в Москве и Питере?
Не плохой или хороший Амфетамин можно Купить в Москве и Питере на своей улице закладкой?
Амфетамин Купить Где Москва и Питер ?
Основные теги - Купить Амфетамин в Москве, Купить Амфетамин в Новосибирске, Купить Амфетамин в Санкт-Петербурге, Купить Амфетамин в Екатеринбурге, Купить Амфетамин в Казани,
Купить Амфетамин в Нижнем Новгороде, Купить Амфетамин в Красноярске, Купить Амфетамин в Челябинске, Купить Амфетамин в Уфе, Купить Амфетамин в Самаре,
Купить Амфетамин в Ростове на Дону, Купить Амфетамин в Краснодаре, Купить Амфетамин в Омске, Купить Амфетамин в Воронеже, Купить Амфетамин в Перьми, Купить Амфетамин в Волгограде.
Дополнительные теги - Купить Шишки в Москве, Купить экстази в Москве , Купить гашиш в Москве, Купить мефедрон в Москве, Купить экстази в Москве, Купить МДМА в Москве,
Купить лсд в Москве, Купить Амфетамин в Москве, Купить скорость альфа ПВП в Москве, Купить гидропонику в Москве, Купить метамфетамин в Москве, Купить эйфоретики в Москве,
Купить закладки в Москве, Купить ШИШКИ закладкой в Москве , Купить Стимуляторы в Москве, Купить Галлюцыногены в Москве, Купить Наркотики закладкой в Москве. Тег окончен
Купить Метамфетамин в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Метамфетамин Киев? САЙТ - KOKS.TOP
(DanielkaEcots, 11. 2. 2024 4:45)
Купить Метамфетамин в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Метамфетамин Киев? САЙТ - KOKS.TOP
ДОСТАВКА ТОВАРА В РУКИ - https://koks.top/
ЗАКАЗЫ ОНЛАЙН ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks.top/
ЗАКЛАДКИ ОНЛАЙН НА САЙТЕ - https://koks.top/
ССЫЛКА ДЛЯ СВЯЗИ С ОПЕРАТОРОМ - https://koks.top/
КУПИТЬ МЕТАМФЕТАМИН ОНЛАЙН С ДОСТАВКОЙ - https://koks.top/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Купить Метамфетамин в Киеве"
Сколько Стоит Метамфетамин в Киеве в розницу? Кто обычно покупает Метамфетамин в Киеве? Как изготавливают Метамфетамин который можно купить в Киеве?
Сколько лет уже продают качественный Метамфетамин в Киеве закладками? Как можно купить Метамфетамин в Киеве с доставкой в руки?
Надежность покупок Метамфетамин в Киеве с максимальной скоростью доставки товара в руки? Какой минимальный заказ покупки Метамфетамин в Киеве при заказе онлайн?
Самый быстрый способ Купить Метамфетамин в Киеве без посредников? Купить Метамфетамин в киеве на прямую без третьих лиц? Сколько нужно грамм для употребления Метамфетамин в Киеве?
Мой друг знает где быстро Купить Метамфетамин в Киеве в ночное время суток без номера телефона курьера, всё полностью онлайн и анонимно!
Если есть желание покупать Метамфетамин в Киеве по самой демократичной и низкой цене по сравнению с качеством то Вам несомненно нужно посетить сайт на котором продают Метамфетамин в Киеве?
Метамфетамин в Киеве после которого нет головных болей, ломоты в суставе и ломки как после уличных наркотиков? Бесплатная доставка Метамфетамин в Киеве по средах каждого месяца!
Мелкие и крупные покупки Метамфетамин в Киеве, Оптом Метамфетамин в Киеве? В розницу Метамфетамин в Киеве? Всё это без проблем может обеспечить всего один сайт в кратчайшие сроки!
Челоек - Паук вместо паутины плетёт Метамфетамин нить, которую иногда можно перепутать с Метамфетамин в Киеве по самой доступной цене на этом узкопрофильном рынке!
Каждая собака в Киеве знает где купить Метамфетамин на розвес так сказать, разфасованный товар до милиграмма с точностью швейцарских часов Киевских Метамфетаминовых весов?
Моя молодая подруга мне подсказала где в Киеве Купить Метамфетамин такого качества, что потом весь остальной Метамфетамин тв Киеве можно будет просто выкинуть в мусорку без сомнения?
Наш Метамфетамин в Киеве- просто перчик? Про такой Метамфетамин в Киеве даже соченили уже репчик? Какие молодцы люди, которые понимают в качестве и основных ингредиентах приготовления такого Метамфетамин в Киеве?
Меня на улице спросили - Где же мы Можем Купить Метамфетамин в Киеве? И я с гордостью ответил - Метамфетамин в Киеве вы всегда можете преобрести онлайн на официальном доверенном сайте который продает Метамфетамин в Киеве.
Какими способностями обладают люди, которые употребляют Метамфетамин в Киеве без сна даже трое суток, спросите вы? А я отвечу - спустя даже три дня человек употребивший Метамфетамин в Киеве чувствует прилив сил и бодрость!
Мне в замаскированной посылке привезли Метамфетамин в Киеве очень хорошего качества товар для оборота, было много но я не ожидал что будет больше чем нужно?
Общие Теги для Гугл бот - Купить Шишки в Киеве, Купить экстази в Киеве , Купить гашиш в Киеве, Купить мефедрон в Киеве, Купить экстази в Киеве, Купить МДМА в Киеве,
Купить лсд в Киеве, Купить Амфетамин в Киеве, Купить скорость альфа ПВП в Киеве, Купить гидропонику в Киеве, Купить метамфетамин в Киеве, Купить эйфоретики в Киеве,
Купить закладки в Киеве, Купить ШИШКИ закладкой в Киеве , Купить Стимуляторы в Киеве, Купить Галлюцыногены в Киеве. Тег окончен
Купить Гашиш в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Гашиш Киев? САЙТ - KOKS.TOP
(Francesabaw, 11. 2. 2024 2:21)
Купить Гашиш в Киеве? САЙТ - KOKS.TOP Купить Гашиш Киев? САЙТ - KOKS.TOP
ДОСТАВКА ТОВАРА В РУКИ - https://koks.top/
ЗАКАЗЫ ОНЛАЙН ЧЕРЕЗ ТЕЛЕГРАММ - https://koks.top/
ЗАКЛАДКИ ОНЛАЙН НА САЙТЕ - https://koks.top/
ССЫЛКА ДЛЯ СВЯЗИ С ОПЕРАТОРОМ - https://koks.top/
КУПИТЬ ГАШИШ ОНЛАЙН С ДОСТАВКОЙ - https://koks.top/
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
Теги поисковых слов для запроса "Купить Гашиш в Киеве"
Сколько Стоит Гашиш в Киеве в розницу? Кто обычно покупает Гашиш в Киеве? Как изготавливают Гашиш который можно купить в Киеве?
Сколько лет уже продают качественный Гашиш в Киеве закладками? Как можно купить Гашиш в Киеве с доставкой в руки?
Надежность покупок Гашиш в Киеве с максимальной скоростью доставки товара в руки? Какой минимальный заказ покупки Гашиша в Киеве при заказе онлайн?
Самый быстрый способ Купить Гашиш в Киеве без посредников? Купить Гашиш в киеве на прямую без третьих лиц? Сколько нужно грамм для употребления Гашиш в Киеве?
Мой друг знает где быстро Купить Гашиш в Киеве в ночное время суток без номера телефона курьера, всё полностью онлайн и анонимно!
Если есть желание покупать Гашиш в Киеве по самой демократичной и низкой цене по сравнению с качеством то Вам несомненно нужно посетить сайт на котором продают Гашиш в Киеве?
Гашиш в Киеве после которого нет головных болей, ломоты в суставе и ломки как после уличных наркотиков? Бесплатная доставка Гашиш в Киеве по средах каждого месяца!
Мелкие и крупные покупки Гашиша в Киеве, Оптом Гашиша в Киеве? В розницу Гашиш в Киеве? Всё это без проблем может обеспечить всего один сайт в кратчайшие сроки!
Челоек - Паук вместо паутины плетёт Гашиш нить, которую иногда можно перепутать с Гашиш в Киеве по самой доступной цене на этом узкопрофильном рынке!
Каждая собака в Киеве знает где купить Гашиш на розвес так сказать, разфасованный товар до милиграмма с точностью швейцарских часов Киевских Гашишных весов?
Моя молодая подруга мне подсказала где в Киеве Купить Гашиш такого качества, что потом весь остальной Гашиш тв Киеве можно будет просто выкинуть в мусорку без сомнения?
Наш Гашиш в Киеве- просто перчик? Про такой Гашиш в Киеве даже соченили уже репчик? Какие молодцы люди, которые понимают в качестве и основных ингредиентах приготовления такого Гашиша в Киеве?
Меня на улице спросили - Где же мы Можем Купить Гашиш в Киеве? И я с гордостью ответил - Гашиш в Киеве вы всегда можете преобрести онлайн на официальном доверенном сайте который продает Гашиш в Киеве.
Какими способностями обладают люди, которые употребляют Гашиш в Киеве без сна даже трое суток, спросите вы? А я отвечу - спустя даже три дня человек употребивший Гашиш в Киеве чувствует прилив сил и бодрость!
Мне в замаскированной посылке привезли Гашиш в Киеве очень хорошего качества товар для оборота, было много но я не ожидал что будет больше чем нужно?
Общие Теги для Гугл бот - Купить Шишки в Киеве, Купить экстази в Киеве , Купить гашиш в Киеве, Купить мефедрон в Киеве, Купить экстази в Киеве, Купить МДМА в Киеве,
Купить лсд в Киеве, Купить Амфетамин в Киеве, Купить скорость альфа ПВП в Киеве, Купить гидропонику в Киеве, Купить метамфетамин в Киеве, Купить эйфоретики в Киеве,
Купить закладки в Киеве, Купить ШИШКИ закладкой в Киеве , Купить Стимуляторы в Киеве, Купить Галлюцыногены в Киеве. Тег окончен
Let the pursuit of knowledge lead you to new perspectives and endless opportunities for growth.
(JackPeert, 10. 2. 2024 22:56)
Hello everyone!
I suggest checking out these resources, where you'll find plenty of helpful, well-organized information, whether you have questions or just need a break from your work:
https://www.fyple.biz/company/national-casino-q1075sd/
https://www.tripadvisor.com.au/Profile/frumzicas
Good luck! If you know similar ones, be sure to let us know)
Exploring valuable knowledge adds vibrancy to our lives.
(JackPeert, 10. 2. 2024 21:59)
Hello everyone!
I suggest checking out these resources for plenty of helpful, well-organized information. Whether you have questions or just need a break from your workload, they're worth a visit:
https://www.geelongdiscus.com.au/profile/wildcardcityjokaroomlogin/profile
https://creator.wonderhowto.com/thepokiesnetcasino/
Good luck! If you know similar ones, be sure to let us know)
Turkey News Today
(MatthewLet, 10. 2. 2024 15:51)
Latest news on politics, business, lifestyle, sports and more from Turkey and the world at turkeynewstoday.com
https://www.turkeynewstoday.com/
Washington Post Today
(RobertAroug, 10. 2. 2024 8:09)
Breaking news, live coverage, investigations, analysis, video, photos and opinions from The Washington Post.
https://www.washingtonposttoday.com/
Bloomberg News Today
(XRumer23Kam, 10. 2. 2024 1:19)
Bloomberg delivers business and markets news, data, analysis, and video to the world, featuring stories from Businessweek and Bloomberg News Today.
https://www.bloombergnewstoday.com/
Investigation, right-minded a trial
(Jamesvom, 10. 2. 2024 1:04)
To the fullest extent bases to save Xrumer 23 ai Trained and GSA Search Appliance Ranker
https://dseo24.monster
British News Today
(Michaelvax, 8. 2. 2024 14:06)
Breaking news, features, analysis and debate plus audio and video content from England, Scotland, Wales and Northern Ireland.
https://www.britishnewstoday.com/
Подскажите, где прочитать статьи про настройку устройств и софта?
(IgorBaide, 8. 2. 2024 0:48)
Dobrý den!
Иногда необходимо настроить разные устройства и программы, искал в сети что-то стоящее и информационное по данной тематике.
Нужно было настроить спутниковую антенну, универсальный пульт и построить локальную сеть, такие разные задачи!
Нашел интересный проект, а на нем все ответы, подробно и с картинками, это действительно стоит добавить в закладки
https://csyazzle.ru
https://cssapemaster.ru
Если Вы можете подсказать еще похожие проекты, буду рад.
https://www.cssapemaster.ru/kak-nastroit-internet-na-bilajne-bez-problem
https://www.csyazzle.ru/kak-nastroit-wifi-i-rezhim-routera-byfly-na-modeme
Всем хорошего настроения!
can I ask you something?
(Georgefus, 7. 2. 2024 23:22)
Text Inmate
https://www.contactmeasap.com/
Feel the excitement of new experiences with video roulettes of models for all tastes and themes. Start here >>>>
(Janagrets, 7. 2. 2024 17:48)
Hello! Iam Jana, very nice and sexy bi girl from Sweden!
I like chat and play with mens and womens)
Not enough zest in life? Video roulettes with models for every taste and theme, here >>>>
Meet the best online resource for webcam models! Free, available 24/7, with a variety of fantasies.
Your online arena for fantasy! Chat roulette with webcam models of any genre. Fast, convenient, in HD+ quality!
https://dk.jasminchat.net
https://hu.livesexchat18.com
Wait there personally YOU!!!
Nevěřil jsem tomu, ale smích může ovlivnit sílu!
(EvgenCes, 7. 2. 2024 17:29)
Ahoj všichni!
Chci se podělit o skutečné zkušenosti, s věkem se moje sexuální síla začala zmenšovat a nakonec se dostala na žalostnou úroveň(
Ani ty nejkrásnější a nejmladší dívky ve mně nevzbudily potřebnou energii…
Bylo to hrozné a začala deprese, když jeden známý řekl, že je třeba denně číst anekdoty a smát se a vše se postupně zlepší.
Doporučil mi tento web
https://www.kompotanekdot.ru/anekdoty-pro-vasilija-ivanovicha-chapaeva-i-petku/
Říkal jsem si, co je to za nesmysl, ale nebylo co dělat, a začal jsem se systematicky smát a číst vše o humoru!
Nevěřil jsem tomu, ale po dvou týdnech se moje síla vrátila do normálu a mohl jsem se vrátit do milostných prostor a chodit s modelkami!
Děkuji za smích a anekdoty a buďte zdraví)
Je mi 87 let, ale v posteli jsem stále stejně silný)
Your key to an adrenaline-pumping experience! Webcam models and video chats for all occasions are available right now.
(Janagrets, 7. 2. 2024 17:01)
Hello! Iam Jana, very nice and sexy bi girl from Sweden!
I like chat and play with mens and womens)
Dive into the world of entertainment with top dating video chats. This is a real explosion of emotions!
Feel the excitement of new experiences with video roulettes of models for all tastes and themes. Start here >>>>
Your personal portal to the world of online entertainment! Webcam models are waiting for you, offering a variety of fantasies and emotions.
https://lv.video24chat.ru
https://fi.sexruletka.net
Wait there personally YOU!!!
Нашел интересный ресурс про собак и щенков, а Вы?
(JasonHon, 7. 2. 2024 12:03)
Dobrý den!
Недавно приобрел себе новую собаку, щенка Хаски, и еще у меня живут 2 лабрадора, и возникла необходимость найти кое какую информацию, в сети оказалось так много разного мусора и рекламы, Я не сильно разбираюсь в этом(
Друзья подсказали проект – https://www.dogidogi.ru + https://dzen.ru/dogidogi
И знаете, там все просто написано, оказалось то что нужно!
Удобный поиск, минимум ненужных медиа включений, все работает как часы!
Буду рад если Моя рекомендация Вам поможет, с вопросами про собак и щенков, удачи!
Jak najít odpovědi na kontrolní práce a v klidu spát?
(MashaOmiva, 7. 2. 2024 11:24)
Ahoj všichni!
Jsem Máša, je mi 32, žiji v Anglii, vychovávám 2 děti, které chodí do školy)
Škola je to docela velký stres, jak pro děti, tak pro rodiče, a neustálé lekce a příprava na zkoušky z profilových předmětů mě přiváděly k šílenství(
Začala jsem být nervózní, přestala jsem spát s manželem a začal nervový tik, bylo to hrozné…
Je dobře, že kamarádky doporučily najít stránky s řešeními a vyzkoušet si domácí lekce podle jejich metodiky.
Mimochodem, dobrý web
https://www.controlworks.ru/kontrolnaja-rabota-nomer-6-5-klass/
Žádné reklamy,pohodlné vyhledávání a mnoho cenných informací o kontrolách!
Abych byla upřímná, začala jsem v klidu spát, obnovil se sex a klid v rodině, děkuji takovým webům, kde najdete řešení a věnujte více času svým oblíbeným činnostem!
Hodně štěstí!
Víte, že smích prodlužuje život!?
(DinaLok, 7. 2. 2024 11:19)
Dobrý den!
Jsem Dina, je mi 35, krásná a milá, chci mluvit o svém objevu)
Dříve jsem měla negativní pohled na mnoho věcí, často jsem se starala o ekologii, lidi, politiku a začalo to mít špatný vliv na mé zdraví a kvalitu života obecně.
Psycholog mi poradil, ať se víc směju a neřeším, co se nedá změnit, jaký to má smysl!
Začala jsem pravidelně číst vtipy a weby s humorem a po 2 měsících jsem se stala jinou osobou, klidnější a laskavější, věci šly do hor a lidé chtějí být více v mé společnosti, žádný odraz od mužů.
Doporučuji všem, kteří mají rádi anekdoty, tento web
https://www.anekdotor.ru/anekdoty-pro-zhenu-smeshnye-i-poshlye-anekdoty-pro/
Je to jednoduché a o věci, čtěte se smějte a buďte zdraví!
Hodně štěstí přátelé)
Индексиране на сайта
(StevenNodia, 7. 2. 2024 10:01)
I love checking your websites. Appreciate it!
Вижте и страницата ми
https://holden.asger.xyz/wiki/User:JanellHoff0 висококачествено съдържание
=3345re=
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
Где Купить Амфетамин? САЙТ - KOKS24.CC Как Купить Амфетамин? САЙТ - KOKS24.CC
(Alfonzorcix, 11. 2. 2024 11:30)