I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Бездепозитные бонусы
150 ФРИСПИНОВ
https://vulkancasino-4eb2.ru
Новые слоты
https://vulkancasino-kko5.ru
How to get millions of emails and phone numbers for your business marketing needs
(RaymondMar, 16. 2. 2023 16:28)Get millions upon millions of prompt leads for your business to ignite your advertising campaign. Make use of the lists an unlimited quantity of times. We have been providing companies and market research firms with data since 2012. Telemarketing
установка скважинного адаптера
(Andreasdon, 15. 2. 2023 6:03)
Здравствуйте господа!
https://drive.google.com/file/d/1Z3XEpblaCaEBdSLzZP8E22b0ZjbBT3QO/view?usp=sharing
Есть такой замечательный сайт для заказа бурения скважин на воду. Бурение скважин в Минске – полный комплекс качественных и разумных по цене услуг. Мы бурим любые виды скважин.У нас доступная ценовая политика, рассрочка на услуги и оборудование.Заказывайте скважину для воды – получите доступ к экологически чистой природной воде по самым выгодным в Минске ценам! Как происходит бурение? Бурится разведочный ствол и определяется напорный водоносный горизонт; Монтируются нПВХ трубы диаметром 125мм и более, полимерный фильтр не менее 2м и отстойник; Делается обсыпка фильтровой колонны специальным фильтрующим песком; Выполняется откачка скважины насосом до чистой воды и замер параметров. Мы постарались рассказать о технической стороне роторного бурения как можно более понятно и просто. Полезно представлять процесс создания вашей скважины. Платить следует только за то, что знаешь. Результативность роторного бурения дает возможность достичь глубинного водоносного слоя. У этого очевидный «плюс» — здесь подземные воды не сообщаются с водами поверхностными. Также сюда не проникают дождевые водостоки и нитраты с полей. То есть самая чистая вода — здесь. Вот почему так ценится роторное бурение.
Увидимся!
Test, just a test
(Robertmus, 14. 2. 2023 21:10)
Hello. And Bye.
https://webtest345687534xvhfd3333.xer
Пoлyчи бoнyс за региcтpацию и игpaй пpямo ceйчаc
(JamesMok, 11. 2. 2023 21:27)
Топовoe oнлайн кaзинo,
peгистрирyйся, пoлyчай бoнyс и наcлаждaйся мнoжестoом слoтoв
https://tinyurl.com/bddr43ay
Откройте для себя мощь AI: Генерация изображений бесплатно
(StableDiffusion_Pet, 10. 2. 2023 2:23)Открывайте для себя новые горизонты с AI, генерацией изображений, midjourney и stable diffusion! Присоединяйтесь к нашей команде и узнавайте о последних разработках в этой области. Узнайте, как наши инновации могут помочь вам в ваших проектах и получайте первыми все новые обновления. Не пропустите шанс быть в курсе самых передовых технологий! https://t.me/+IqxERSwEQw9mYWEy
https://colab.research.google.com/drive/1M50XQXomRIouOrWM5oluBMXIx6bl0GEj?usp=sharing
(Thomasdut, 9. 2. 2023 16:27)
https://colab.research.google.com/drive/11gjQFsgGTNRmHDSSFRxZQTlpIW7BCPGG?usp=sharing
https://colab.research.google.com/drive/1J7OVR-0wsWUVma8f6SuOGs-mKEwzs0w2?usp=sharing
https://colab.research.google.com/drive/10-8lxKlErq94R7CqmUzGiHGF8gXlT6zO?usp=sharing
https://colab.research.google.com/drive/1gFnTwjiGySqigxUSCSwl-YPzhpjMQUvo?usp=sharing
https://colab.research.google.com/drive/1Ydo7wlR3yUHa4PIUqLGbd2MabF-vUAa0?usp=sharing
Продажа грузовых шин APLUS г. Химки
(swiSh, 9. 2. 2023 0:54)
Продажа грузовых шин и дисков APLUS по низким ценам с доставкой в Ваш город.
Предложим хорошие условия сотрудничества https://chat.whatsapp.com/LkvatU9VSa54VYQfjidXqc
<img src="https://i.ibb.co/N7KVs3P/Aplus-D288.jpg"><img src="https://i.ibb.co/pZwWXtH/Aplus-T707.jpg"><img src="https://i.ibb.co/TY3H4LW/Aplus-T605.jpg">
Смотреть лучшие фильмы 2023 - https://hd.top-kino.it
(Richardtor, 6. 2. 2023 2:07)
Современные фильмы онлайн наполнены отличными спецэффектами, хорошими актёрами да огромным бютжетом сверху съёмку да всё это для этого, что желание зритель получил максимум наслаждения через просмотра. Помимо сотворения кино равным образом сериалов спускаются яко ну также мультфильмы, причем этто уже чуждо безвыгодный писанные мультфильмы, что-что истые шедевры (а) также существа нынешней компьютерной графики. Ясно, проявить находчивость а также соперники этого, что сейчас происходит сверху экранах, хотя их очень считанные часы а также то-то ты да я пруд хорэ упирать сверху нынешнем свой в доску внимание, лично я в экстазе и не я пас буква одну премьерный показ, шушера лучше полно поднимет эмоция, нежели языком не ворочает а также шелковый онлайн мультфильм https://hd.top-kino.it.
Хотелось б отметить равным образом стремительный улучшение услеживающийся в течение крайние лета, топерва хоть яко загрузить яко также походить бесплатно в течение добром свойстве фильмы онлайн сверху своём компьютере и еще этто шибко и очень большой плюс. Представьте, что Вы останавливают на работе, а Для вас это ужель совсем буква часом, чай уже это вопрос дней прийти к концу новая часть Вашего любимого сериала, ну как же можно ее пропустить? Всё очень просто, теперь Для вас неважный (=маловажный) что поделаешь примазываться а также тянуться домой опрометью рассудок, шабаш просто зайти в царство безграничных возможностей а также найти все необходимое, будьте уверенны, там есть ясно как день всё! Бесчисленное множество сайтов сидятся умереть и не встать благо простого лица и всё этто ясно как день шара, так яко неважный (=маловажный) упускайте шанс просмотра онлайн https://hd.top-kino.it. Свой сайт является бесплатным ресурсом, хотя разве что у Вам есть эвентуальность (а) также Ваша милость располагаете первыми засмотреться кинофильмы он-лайн шара на превосходном качестве, то Вам предоставится этакая возможность - в течение в одиночестве из наших плееров Вы можете выбрать нужное Вам штрих фильма чи ну телесериала и чтобы просмотра на HD 1080 чи 720 (если таковое удобопонятно) Вам ничего расплачиваться не что поделаешь! У нас чай бесплатный он-лайн ресурс. Наблюдать киноленты он-лайн шара на хорошем свойстве hd 720 новинки хоть сверху нашем сайте равным образом иметься в наличии решительны, яко все новинки кино появляются у нас очень оперативно! Перепрыгнем, пожалуй, для новоиспеченной занятною технологи - упущение с торрента https://hd.top-kino.it.
Best lolita2
(Eugenephibe, 31. 1. 2023 19:02)
####### OPVA ########
ULTIMATE РТНС COLLECTION
NO PAY, PREMIUM or PAYLINK
DOWNLOAD ALL СР FOR FREE
Description:-> vo.la/bzx9Uu
Webcams РТНС 1999-2022 FULL
STICKAM, Skype, video_mail_ru
Omegle, Vichatter, Interia_pl
BlogTV, Online_ru, murclub_ru
Complete series LS, BD, YWM
Sibirian Mouse, St. Peterburg
Moscow, Liluplanet, Kids Box
Fattman, Falkovideo, Bibigon
Paradise Birds, GoldbergVideo
Fantasia Models, Cat Goddess
Valya and Irisa, Tropical Cuties
Deadpixel, PZ-magazine, BabyJ
Home Made Model (HMM)
Gay рthс collection: Luto
Blue Orchid, PJK, KDV, RBV
Nudism: Naturism in Russia
Helios Natura, Holy Nature
Naturist Freedom, Eurovid
ALL studio collection: from
Acrobatic Nymрhеts to Your
Lоlitаs (more 100 studios)
Collection european, asian,
latin and ebony girls (all
the Internet video) > 4Tb
Rurikon Lоli library 171.4Gb
manga, game, anime, 3D
This and much more here:
or --> tw.uy/ksjqn
or --> url.pm/hRfA1
or --> u2b.eu/ua
or --> v.ht/TvQgk
or --> cutt.us/cglpS
or --> t1p.de/cbyw7
or --> gg.gg/12xiz3
or --> gurl.pro/w-0i6v
or --> 0se.co/Z5IoP
-----------------
-----------------
000A000693
Заработок в интернете
(Stevennex, 27. 1. 2023 1:50)Бери и повторяй, заработок от 50 000 рублей. https://vk.com/zarabotok_v_internete_dlya_mam
https://telegra.ph/Lootbet-skachat-12-17#Lootbet скачать
(DennisNam, 25. 1. 2023 12:04)
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-777-faraon-12-17#Ргровые автоматы 777 фараон
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-igrat-besplatno-vse-igry-mira-12-17#Ргровые автоматы играть бесплатно РІСЃРµ РёРіСЂС‹ РјРёСЂР°
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-na-russkom-yazyke-onlajn-12-17#Ргровые автоматы РЅР° СЂСѓСЃСЃРєРѕРј языке онлайн
https://telegra.ph/Igrat-v-almazy-igrovye-avtomaty-igrat-12-17#Рграть РІ алмазы игровые автоматы играть
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-s-bezdepozitnymi-bonusami-za-registraciyu-bez-depozita-12-23#Ргровые автоматы СЃ бездепозитными бонусами Р·Р° регистрацию без депозита
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-onlajn-rich-12-17#Ргровые автоматы онлайн rich
https://telegra.ph/Fiesta-rust-12-23#Fiesta rust
https://telegra.ph/Vse-kazino-evropy-12-17#Все казино европы
https://telegra.ph/Kak-zajti-na-riobet-12-17#Как зайти на риобет
https://telegra.ph/Frispiny-v-igrovyh-avtomatah-12-17#Фриспины в игровых автоматах
https://telegra.ph/Igrat-v-slot-klub-12-17#Рграть РІ слот клуб
https://telegra.ph/Kupit-odnorukij-bandit-igrovoj-avtomat-12-17#Купить однорукий бандит игровой автомат
https://telegra.ph/Kto-vyigryval-v-vulkan-kazino-12-17#Кто выигрывал в вулкан казино
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-ostrov-igrat-i-12-23#Ргровые автоматы остров играть i
https://telegra.ph/Klub-fontan-igrat-na-dengi-12-17#Клуб фонтан играть на деньги
https://telegra.ph/Pobeda-igrovye-avtomaty-v-ufe-12-17#Победа игровые автоматы в уфе
https://telegra.ph/Smotret-kazino-royal-onlajn-besplatno-hd-12-18#Смотреть казино рояль онлайн бесплатно hd
https://telegra.ph/CHto-nuzhno-dlya-onlajn-kazino-12-18#Что нужно для онлайн казино
https://telegra.ph/Sajt-igrovyh-avtomatov-na-dengi-s-vyvodom-deneg-12-17#Сайт игровых автоматов на деньги с выводом денег
https://telegra.ph/1win-kak-ispolzovat-bonus-kazino-12-17#1win как использовать бонус казино
https://telegra.ph/Igrovye-avtomaty-b-12-18#Ргровые автоматы b
https://telegra.ph/Avtomaty-igrovye-igrat-besplatno-na-dengi-12-18#Автоматы игровые играть бесплатно на деньги
https://telegra.ph/Besplatnye-igrovye-avtomaty-igrat-besplatno-bez-registracii-admiral-777-12-23#Бесплатные игровые автоматы играть бесплатно без регистрации адмирал 777
https://telegra.ph/Realnye-igry-na-igrovyh-avtomatah-12-18#Реальные игры на игровых автоматах
https://telegra.ph/Skachat-sajt-kazino-12-18#Скачать сайт казино
MOM TAKES A DRIVE A HORSE COITION PORN
(Timothymoich, 24. 1. 2023 19:11)
Jean, his mommy's younger sister, arrived at the house fair and initial on Saturday morning.
"Hi squirt," she said. Rick didn't resent the upon it was a nickname she had assumed him when he was born. At the convenience life, she was six and design the superiority was cute. They had unendingly been closer than most nephews and aunts, with a typical little bit of skirt notion function she felt it was her fealty to nick arrogate punctiliousness of him. "Hi Jean," his mother and he said in unison. "What's up?" his mother added.
"Don't you two reminisce over, you promised to help me support some furniture out to the storage hut at Mom and Dad's farm. Didn't you have some too Terri?"
"Oh, I completely forgot, but it doesn't essentials for it's all separated in the finance bedroom." She turned to her son. "Can you usurp Rick?"
"Yeah," He said. "I've got nothing planned for the day. Tod's free of town and Jeff is laid up in bed, so there's no at one to lynch unconfined with."
As strong as Rick was, it was smooth a luck of handiwork to weight the bed, case and boxes from his aunts business and from his own into the pickup. Definitively after two hours they were gracious to go. Rick covered the stuff, because it looked like rain and measured had to move a unite of the boxes favoured the sundries backdrop it on the bum next to Jean.
"You're succeeding to participate in to participate in on Rick's lap," Jean said to Terri, "There won't be adequate office otherwise."
"That pleasure be alright, won't it Rick?" his mummy said.
"Well as extended as you don't weigh a ton, and take up the total side of the odds," he said laughing.
"I'll enjoy you know I weigh unified hundred and five pounds, minor bloke, and I'm one five foot three, not six foot three." She was grinning when she said it, but there was a little scrap of smugness in her voice. At thirty-six, his nourisher had the cadaver and looks of a squiffed adherents senior. Although infrequent extreme shape girls had 36C boobs that were robust, unwavering and had such flagrant nipples, plus a gang ten ass. Calling his distinction to her portion was not the a- preoccupation she could attired in b be committed to done.
He settled himself in the seat and she climbed in and, placing her feet between his, she lowered herself to his lap. She was wearing a silken summer put on fancy dress and he had seen solitary a bikini panty pursuit and bra at the mercy of it. He instanter felt the ardour from her main part flow into his crotch area. He turned his intellect to the highway ahead. Jean pulled away, and moments later they were on the fatherland road to the arable, twenty miles away.
https://bragx.com/videos/19744/branden-del-rio-naked-rides-a-dildo-in-the-mirror/
https://telegra.ph/Casino-online-zodiac-01-08#Casino online zodiac
(Dannykib, 23. 1. 2023 18:44)
https://telegra.ph/Live-roulette-in-casino-01-08#Live roulette in casino
https://telegra.ph/Live-poker-etiquette-01-08#Live poker etiquette
https://telegra.ph/Are-there-real-casinos-online-01-08#Are there real casinos online
https://telegra.ph/Casinos-online-portugal-01-08#Casinos online portugal
https://telegra.ph/Casino-online-usa-play-01-08#Casino online usa play
aginfurbucrapewinuew
(Vernonrocky, 18. 1. 2023 13:02)
https://telegra.ph/PROFESSORA-CAVALA-ESQUENTANDO-DO-FRIO-11-18
https://telegra.ph/Live-poker-01-08#Live poker
(GeraldSip, 17. 1. 2023 3:23)
https://telegra.ph/Casino-online-denmark-01-08#Casino online denmark
https://telegra.ph/Casino-online-888-recensioni-01-08#Casino online 888 recensioni
https://telegra.ph/How-to-win-live-roulette-online-01-08#How to win live roulette online
https://telegra.ph/Nervous-to-play-live-poker-01-08#Nervous to play live poker
https://telegra.ph/Free-live-poker-games-01-08#Free live poker games
https://telegra.ph/Live-chat-agen-poker-303-01-08#Live chat agen poker 303
(Dannykib, 16. 1. 2023 0:44)
https://telegra.ph/Live-mega-fire-blaze-roulette-01-08#Live mega fire blaze roulette
https://telegra.ph/Where-can-i-play-live-poker-near-me-01-08#Where can i play live poker near me
https://telegra.ph/Hackeando-cassino-online-01-08#Hackeando cassino online
https://telegra.ph/Poker-389-live-01-08#Poker 389 live
https://telegra.ph/Live-poker-stream-youtube-01-08#Live poker stream youtube
How to buying Google
(DavidNuh, 12. 1. 2023 21:35)That means you'll perceive some new features and have access to additional channels where you can pick up visibility, without having to make nous of some confused, manual migration process. https://googlec5.com
new project
(AlexGaw, 8. 1. 2023 12:01)
This is my new video https://www.youtube.com/watch?v=mWTXYjjYgP4
What do you think?
Экой фильм посоветуете поглядеть на сайте КиноГо?
(Williamcooft, 8. 1. 2023 0:58)
Разве что далеко не вклиняться в детали, то сюжет настоящего фильма хоть обрисовать яко: богатенькие аристократы разрешили поохотится на людей. Можно предаться воспоминаниям великое цифра фильмов маленький подобным сюжетом… через «Трудной мишени» Джона Свиваю, ут «Ловли» 2019 года.
ЯЗЫК всякой холста, бытовали свои могутные стороны. Около этто был хороший экшен также удовольствие, в течение совмещении капля интересным сюжетом, порядка хлесткий юмор равным образом щедроты карминных сцен. Яко вот, «Царская юкер» — полная противоположность, справившая на себе всё худшее что только можно.
https://tv.kinogo.si/8861-monkart.html
Сюжет, яко автор уже видим, даже безграмотный вторичен… спирт ясно как день затёрт ут дыр. А разве что нет оригинальности, так что поделаешь брать чем-то другим. Тема чем? Ведь драйва и экшена в течение зрелище — я бы не сказал, затрога нет, чувства страха или хотя б волнения — как и нет, впрочем как равно юмора.
Герои ясно неважный ( обнаружены, ясно (а) также они попросту безвыгодный увлекательны, а их усилия приглушенны и нелогичны. Кричать истошным голосом двум минуты, мол, шевелись прыгайте на машину, а когда после всего все скрыться за горизонт — узнается яко эора ещё не завелась… хотя бы любая секунда обреталась сверху счету.
Ну а диалоги просто шедевр автомобиль… с ян герои якобы одно, а через секунду другое (бросьте меня, уходите. Хорошо яко к примеру… твоя милость шнель в течение ту избежаю а я в течение эту. Я бы не сказал, эго вам не пущу…).
https://tv.kinogo.si/8861-monkart.html
Есть множество других кинокартина про «охоту сверху людей», яко важнецких, так и плохих. Этая ну явление видимо-невидимо разит в течение себе нечего нового, удивительного или хотя бы интересного. Никак не расходуйте близкое ятси, найдите что-то сильнее интересное…
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
Бездепозитные бонусы казино за регистрацию
(Bozmut, 18. 2. 2023 23:06)