I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Привет дамы и господа!
Предлагаем Вашему вниманию высококачественные профессиональные плёнки. Наша организация"ООО Защитные плёнки" работает 15 лет на рынке этой продукции в Беларуси. Дизайнерам, производителям стеклопакетов, мебели и дверей для применения своей продукции в офисах, квартирах и коттеджах мы предлагаем установку декоративной пленки. Проектные и строительные организации для осуществления смелых архитектурных решений могут использовать предложенную нами на выбор тонировочную пленку. Матовые пленки различной цветовой гаммы, установленные в межоконном пространстве, придадут зданию или сооружению неповторимый индивидуальный стиль. Пленки зеркальные оградят посетителей кафе и магазинов или сотрудников офисов на нижних этажах от ненужных глаз.
Более подробная информация размещена https://drive.google.com/file/d/1InniZTJn0UKaO9qp8AMrkpf0ykv3rq9m/view?usp=sharing
С уважением,коллектив "ООО Защитные плёнки".
Decoding ioncube encrypted php files
(DecodeSport, 8. 11. 2022 6:09)
Decoding:
IonCube Decoder / Source Guardian / Zend / TrueBug
DECODING:
PHP 5.6 / 7.0 / 7.1 / 7.2 / 7.3 / 7.4 ALL PHP verions we can DECODE
IonCube Decoder /Decompile prices :
1-5 files = 18$ / file
6-10 files = 15$ / file
11-20 files = 12$ / file
21-50 files = 10$ / file
51-100 files = 9$ / file
101 and more = 8$ / file
Source Guardian / Decompile prices :
1-5 files = 18$ / file
6-10 files = 15$ / file
11-20 files = 12$ / file
21-50 files = 10$ / file
51-100 files = 9$ / file
101 and more = 8$ / file
Contacts:
telegram: https://t.me/MR_Fredo
Jabber : mr_fredo@thesecure.biz
Mail : saportcasino@protonmail.com
I accept payment only: BTC, Perfect Money
Forum verified: https://zerocode.su/index.php?threads/ioncube-decoding-and-deobfuscation-php.9/
In my opinion you are mistaken. I can defend the position. Write to me in PM, we will talk.
(Dwainsmulp, 30. 10. 2022 1:45)
You, probably, were mistaken?
https://freemilfhdtube.com
https://livefootfetishwebcam.com
The Best Window Replacement Companies of 2022
(Best Window lFaisy, 28. 10. 2022 16:03)https://landenvhova.ampblogs.com/A-Review-Of-replacement-windows-near-me-49304779 The Best Window Replacement Companies of 2022 Whether it’s the aesthetics from the outside, or the level of ease from within, a deeply’s windows recreation a deeply important role. Filthy, dated, damaged, and rotting windows flatter the placid look uncouth, while drafty, leaky windows send the energy bill through the roof. Luckily, the best window replacement companies can facilitate those windowpanes (pun intended) and keep the residency looking and feeling up to snuff in no time.
You have hit the mark. In it something is also to me your idea is pleasant. I suggest to take out for the general discussion.
(Dwainsmulp, 26. 10. 2022 4:04)
Certainly. It was and with me.
https://greenreachable.com
https://merevitamins.info
Сколько Стоит Тонировка
(JustinIdeds, 20. 10. 2022 3:28)
Дело в том, что если этого не сделать, то попавшая влага, образует в повреждённом месте грязь, которая внедряется вглубь, закрепляется на неровных краях и очень тяжело вымывается, что впоследствии приводит к резкому увеличению трудозатрат во время ремонта https://autosteklo77.com/magazin/folder/lobovoye-257
Некоторые умельцы пытаются провести ремонт на лобовом стекле, не обращая внимания на наличие влаги в зоне повреждения https://autosteklo77.com/magazin/folder/hyundai-accent-verna-06-11-4d
Это делать категорически нельзя, потому что после заделки и, казалось бы, нормального внешнего вида, влага постепенно начнёт испаряться, оставляя многочисленные пустоты, которые будут явно видны https://autosteklo77.com/magazin/folder/jeep
А их уже устранить невозможно https://autosteklo77.com/katalog-avtostekol/folder/chrysler-300m-98-04
Итог – замена лобового стекла https://autosteklo77.com/magazin/folder/nissan-note-e11-05-13
В подобных ситуациях необходимо как можно быстрее обратиться за помощью к специалистам, иначе трещина доберется до края автостекла https://autosteklo77.com/magazin/folder/volkswagen-passat-b6-05-10-4d
Можете даже не сомневаться: небольшие сколы из-за температурных перепадов либо охлажденного воздуха могут стать причиной разрушения целостности лобового стекла https://autosteklo77.com/katalog-avtostekol/folder/porsche-cayenne-10
При этом ухудшается видимость https://autosteklo77.com/magazin/folder/toyota-camry-cv3-01-06
Далее прикрепляем мост, затем посредством инжектора вводим полимерный состав так, чтобы он полностью залил место слома https://autosteklo77.com/magazin/folder/ford
Устройство вкупе с инжектором, так называемый мост, обычно оборудовано присосками, которыми и прикрепляем всю установку к окну https://autosteklo77.com/magazin/folder/mazda-2-de-07-5d
Инжектор должен оказаться четко над самым сколом https://autosteklo77.com/magazin/folder/renault-scenic-grand-scenic-03-09
Поршень инжектора вкручивается перпендикулярно плоскости окна и выдавливает полимер в щель https://autosteklo77.com/magazin/folder/acura-mdx-yd-01-06
После того, как появляется некоторое сопротивление поршню, надо остановиться и подождать, посмотреть, как полимер заполняет полость скола https://autosteklo77.com/glavnaya/vendor/guardian-ssha
Затем чуть вернуть поршень назад, тем самым создать некоторый вакуум https://autosteklo77.com/magazin/folder/ford
Дальше нужно повторить операцию до полного заполнения всех полостей щели https://autosteklo77.com/magazin/folder/zadneye-416
На окончательном этапе после сушки с отремонтированной области окна нужно убрать пленку и всё прошлифовать https://autosteklo77.com/katalog-avtostekol/folder/lobovoye-61
Обычно это делается специальными пастами https://autosteklo77.com/magazin/folder/land-rover/p/4
Также предварительно излишки полимера, если требуется, удаляются при помощи лезвия, которое нужно держать при работе перпендикулярно к плоскости окна https://autosteklo77.com/stati/article_post/kakogo-proizvoditelya-stekla-luchshe-vybrat
Варианта два: либо заказать оригинальный молдинг для стекла вашего автомобиля, либо просто приехать к нам у нас в наличии всегда имеется различный универсальный молдинг, мы установим его бесплатн
Любое автомобильное стекло каждый день может подвергаться риску повреждения из-за попавших в него небольших камней на дорогах https://autosteklo77.com/magazin/folder/peugeot-206-98-10-5d-hbk
Бывают случаи, когда оно страдает от таких осадков, как град, или даже в небольших авариях https://autosteklo77.com/magazin/folder/lobovoye-377
Характер повреждений может быть самым разным, как и их причины https://autosteklo77.com/magazin/folder/opel-astra-h-04-4d
Flonital
(Flonital, 19. 10. 2022 8:02)
Hello, i read your blog from time to time and i own a similar one and i was just curious if you get a lot of spam comments? If so how do you stop it, any plugin or anything you can recommend? I get so much lately it's driving me crazy so any help is very much appreciated.
Appealing webcam model will grant you all sexual wishes online! Let it all be between you and me!
(WarnaHealt, 13. 10. 2022 19:56)
Hi! Welcome to my absolutely free online video chat with an adorable and delightful webcam girl. Find me here https://i.tr1net.com/YcERWv and make sure it’s true!
Will do everything for you! Call me straight away! It’s all between you and me only!
I congratulate, the excellent message
(Dwainsmulp, 10. 10. 2022 16:46)
It agree, a remarkable piece
https://jaditechniques.com
https://sydneytax.info
Deepnfast
(Cliex, 7. 10. 2022 11:12)
A modern business with low investment For active, outgoing people. High income! Stable payments! Development! The prospect of building a personal business! Deepnfast Social Service of Financial Mutual Support will give you all instruments for make Your life Amazing!
https://deepnfast.com/invite/XSTU1aju
Thanks for a lovely society.
(Dwainsmulp, 6. 10. 2022 4:56)
True idea
https://unprotectedhex.com
https://iagmusic.com
Come and fuck me. Come on! I wanna suck your cock and balls. So wake up and let me in!
(Cindysmasy, 5. 10. 2022 1:19)
Screw me up! I wanna suck your prick and balls. So wake up and find me here https://cutt.us/vL1y0 I can’t wait any longer. Will get on my knees and suck you off!
This offer comes once in a lifetime.
Come up and fuck me! I wanna suck your dick and balls. So wake up and let me in!
(Cindysmasy, 29. 9. 2022 7:52)
Fuck me right now! I wanna suck your prick and balls. So wake up and find me here https://rebrand.ly/suckgirl I can’t wait any longer. Will get on my knees and suck you off!
This chance comes once in a lifetime.
Строители есть? Дайте совет по крове
(theballettheatre, 29. 9. 2022 6:14)
Строители дате совет как лучше сделать кровлю на сарае.
Верней даже из чего её выгодней сделать. Нюанс есть один - крвша должна быть плоская. Такая у меня уж пристройка сделана.
Сейчас смотрел про кровди из мембраны ПВХ https://theballettheatre.com - тут, вроде как смотрится достойно и по долговечнойсти нормально, и по цене выгодно.
Делал ли кто-то из вас с такими крышами? Какие там скрытыекамни, прошу прояснить для нуба.
фотобарабан konica minolta
(Marinahtz, 29. 9. 2022 3:35)
Приветствую Вас товарищи!
https://drive.google.com/file/d/1zAyNo7EsOmhmlRWSMBRtfxA4dC07_ffp/view?usp=sharing
Предлагаем Вашему вниманию сервис оргтехники и продажу расходников для дома и офиса.Наша организация «КОПИМЕДИАГРУПП» работает 10 лет на рынке этой продукции в Беларуси.В сервисном центре клиенты могут заправить картридж сертифицированным совместимым тонером. Мастера проводят перезаправку картриджей лазерных устройств и струйных со встроенной СНПЧ. В случае необходимости можно сделать перепрошивку или замену чипа, благодаря которым пользователи смогут перезаправлять новые чернила практически неограниченное количество раз.Заправка картриджей для принтера обязательно включает проверку состояния комплектующих, в числе которых фотобарабан, вал первичного заряда, ракель, магнитный вал и другие запчасти. При необходимости неисправные или изношенные детали заменяются на новые. На замену стандартным – специалисты могут установить перезаправляемые картриджи.В список предоставляемых услуг входит ремонт и восстановление техники:лазерных и струйных принтеров;МФУ;копировальных аппаратов;факсов;плоттеров.Высокая квалификация специалистов и наличие профильного инструмента позволяют проводить точную диагностику и устранять неисправности абсолютно любого характера.Для устройств Samsung и Xerox проводится перепрошивка. Установка нового программного обеспечения снимает блокировку на заправку оригинальных и установку совместимых картриджей.Как заказать заправку картриджей
gеt nоw # bіg bonus
(Petartag, 28. 9. 2022 0:15)
Best onlіnе саsіno
Bіg bоnus аnd Frееsріns
Spоrt bеttіng аnd pоkеr
go now https://tinyurl.com/44h34y6u
изготовление ступеней из керамогранита
(JesseSulse, 21. 9. 2022 23:50)
https://www.sport-weekend.com/nastennyj-smesitel-dlja-vannoj.htm
Плитка Mirage купить в СПб - каталог Керомаг
Коллекция Jennyfer продажа плитки по доступной цене в интернет-магазине KeramaStyle производителя Уралкерамика (Alma Ceramica) - большой ассортимент товара. Заказ по тел.: +7 (978) 119-19-02. Самовывоз в Симферополе, Евпатории, доставка по Крыму.
полный бэкап
(DarrenLen, 21. 9. 2022 23:19)
https://isf-consultant.ru/chto-takoe-prodvizhenie-v-sotsialnyh-setyah/
Технический аудит сайта
В этот раз я записал инструкцию про создание сайта для клининговой сферы с нуля. При желании вы можете скачать этот сайт и настроить его под себя.
наполнение сайта товаром стоимость
(DanielVew, 20. 9. 2022 9:51)
https://isf-consultant.ru/chto-vam-nuzhno-znat-prezhde-chem-poprobovat-seo-samostoyatelno/
Бесплатные шаблоны uCoz
Готовые решения от 1С-Битрикс-отличные возможности для старта продаж
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
пленка камуфляж на авто
(Antonioyuo, 14. 11. 2022 11:13)