I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Best onlіnе саsіno
Bіg bоnus аnd Frееsріns
Spоrt bеttіng аnd pоkеr
go now https://tinyurl.com/24hkzr86
?????? ?? ?? ???? VPS Egypt - ???? ???? ??????? ??????? ?? ?? ?? ?? ???!
(EgyptianVPS, 14. 6. 2023 13:51)
?????? ?? ?? ???? VPS Egypt - ???? ???? ??????? ??????? ?? ?? ?? ?? ???!
Here are the links in a clickable format:
Cheap SSD Hosting https://www.egyvps.com/category/cheap-ssd-hosting
France Location VDS VPS https://www.egyvps.com/category/france-location-vds-vps
SEO Packages https://www.egyvps.com/category/seo-packages
??? ???? ????? ??????? ??????? ?? ?? ?? ????? ?????? ?? ???. ??? ??? ????? ??? ?? ?? ?? ??? ?????? ?? ?? ???? ???? ?? ?????? ???????.
?? ?? ?? ?? ?????? ?? Virtual Private Server ?? ?????? ????????? ?????. ??? ???? ???? ??????? ?? ?? ?? ?? ??? ????? ??????? ???????? ??????? ??????? ????????. ??? ???? ?????? ?????? ????? ?? ?? ?? ????? ??????????? ????? ???? ?????? ?? ?????.
???? VPS Egypt ????? ?? ??? ???? ????? ??????? ??????? ?? ?? ?? ?? ???. ??? ???? ??????? ??????? ????? ????? ??????. ??? ????? ????? ?????? ??? ???????? ????? ?????? ?????? ???? ????? ??????? ??.
??? ??? ????? ??? ???? ?? ?? ?? ?? ???? ??? ????? ?? ??????? ???. ????? ???????? ?? ?????? ????? ???????? ?????? ????? ????? ??????? ????? ??????? ??? ????.
??????? ????????? ?? ?? ?? ?? ??? ????? ???? ????? ????? ????? ????????? ????????? ??? ???? ?? ????? ??????? ???????? ????? ??????????.
Google SEO https://www.egyvps.com/articles/google-seo
Graphics & Web Design https://www.egyvps.com/articles/graphics-web-design
Advertisement & Promotion https://www.egyvps.com/articles/advertisement-promotion
Web & Software Development
Server VPS VDS
Domain Name Registry https://www.egyvps.com/knowledgebase/server-vps-vds
General Knowledgebase https://www.egyvps.com/knowledgebase/general
Reseller Hosting
Hetzner Cloud
???? ??? ????? ?? ?? ?? ?????? ??????? ?????? ?? ??? ?? ???? VPS Egypt. ?? ?????? ?????? ???? ?????? ?? ?????? ???????? ????????.
????? ???????: ??? ?? ?? ??? ?? ?? ??? ?? ?? ?? ?? ???? ??????? ?? ?? ?? ?? ???? ???? ?????? ??
Top hosting companies in Egypt استضافة مواقع ر
(Egyvps, 10. 6. 2023 23:10)
السيرفرات الصغيرة. الاسعار تبدأ من فقط 200 جنيه شهريا. السيرفرات الكاملة. الاسعار تبدأ من فقط 1190 جنيه شهريا. أداء كامل ، أجهزة كاملة ، حلول تأجير خوادم لكل ...
استضافة مواقع , فى بى اس مصر , اقوى عروض الاستضافة , ارخص عروض الاستضافة , شركة تصميم مواقع واستضافة , شركة استضافة رسمية , عروض استضافة , فى بى اس , فى بى اس ويندوز , فى بى اس لينكس , ارخص عروض الفى بى اس , شركة فى بى اس رخيصة , ارخص عروض الريسلر , الريسلر تصميم , تصميم موقع , مواقع تصميم , تصميم منتدى , فى بى اس مصر , تصميم مواقع , تصميم المواقع , تصميم المنتديات , برمجة مواقع , حجز نطاق , فى بى اس كايرو
Top hosting companies in Egypt
Best web hosting providers in Egypt
Affordable hosting services in Egypt
VPS hosting in Egypt
Dedicated server hosting in Egypt
Cloud hosting in Egypt
Shared hosting providers in Egypt
Website hosting solutions in Egypt
Egyptian hosting companies comparison
Reliable hosting services in Egypt
أفضل شركات استضافة في مصر
خدمات استضافة مواقع في مصر
استضافة مواقع رخيصة في مصر
استضافة سحابية في مصر
خوادم مشتركة في مصر
استضافة مواقع محلية في مصر
استضافة ووردبريس في مصر
خوادم افتراضية خاصة في مصر
استضافة مواقع بالعربية في مصر
شركات استضافة مواقع موثوقة في مصر
شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/
عربتك - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/cart
تسجيل الدخول - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/sign-in
انشاء حساب جديد - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/sign-up
شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/home
السيرفرات الصغيرة (وندوز / لينكس) - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/ar/category/173?chl=true
السيرفرات الكاملة - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/ar/category/23?chl=true
سيرفرات كونكر - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/ar/category/246
سيرفرات سيلك رود - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/ar/category/249
اتصل بنا - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/contact
طلب خطة 1 - شركة ايجى فى بى اس لخدمات السيرفرات - https://www.egyvps.com/order-steps/server/103
فى بى اس , فى بى اس ويندوز , فى بى اس لينكس , فى بى اس فايف ام , فى بى اس سيرفر , فى بى اس سيرفرات , فى بى اس , فى بى اس ويندوز , فى بى اس لينكس , فى بى اس , فى بى اس , VPS , VPS HOST , VPS FiveM , FiveM , vps windows , vps linux , vps sentos , vps game , فى بى اس , HOST FiveM , فى بى اس مصر , شركة فى بى اس كايرو , شركة مصرية و لدينا وكلاء في معظم الدول العربية تقدم اقوي عروض الفى بى اس , فى بى اس كايرو , فى بى اس 1 جيجا , فى بى اس 2 جيجا , فى بى اس مجاني , في بي اسات , فى بى اس مصر , شركة كل حاجه , المحترفين العرب , كويك ويب , استضافة الحلم , فى بى اس , عرب فى بى اس , فى بى اس سرو , عرو ض الفى بى اس , عمل سيرفرات كونكر تهيس , فى بى اس , وعمل صفح تسجيل كونكر تهييس , وحمايه السيرفرات حمايه كامله استضافة و تصميم للمواقع افضل عروض الريسلر و اقوى عروض الفى بى اس وارخصها , افضل عروض سيرفرات متاحة , سورسات كونكر تهيس , صفحات تسجيل كونكر , عروض فى بى اس , شركة فى بى اس , شركه فى بى اس , شركه فى بى اس , عروض سورسات مميزة , فى بى اس مصر, شركه فى بى اس مصر , فى بى اس , شركة فى بى اس , فى بى اس مجاني , عروض الاوتوباتش , فى بى اس , فى بى اس
Thank
(Tepli_cert, 8. 6. 2023 8:22)
Компания "Теплицы Нижний Новгород" предлагает надежные теплицы с усиленным каркасом и дугами из прочного поликарбоната. Ширина теплиц производства нашей компании доступны от 2 до 5 метров. Защищенная от коррозии дуга обеспечивает необходимую прочность при сборке теплицы. Цены на нашу продукцию приемлемы и выгодны. У нас работают опытные мастера, готовые собрать теплицу в кратчайшие сроки. Мы предлагаем доставку по Нижнему Новгороду и ближнему регионам по выгодной цене. Постоянно действуют акции и скидки для наших постоянных клиентов. Если Вы хотите заказать теплицу от производителя, просто свяжитесь нам по указанным контактам. Теплицы Нижний Новгород - это качество и гарантия надежности!
https://www.liveinternet.ru/users/zakazteplic52/profile
https://linktr.ee/zakazteplic52
https://www.reverbnation.com/zakazteplic52
https://www.diigo.com/profile/zakazteplic52
https://www.anobii.com/en/01d7ee939bc9ee91ca/profile/activity
https://artistecard.com/zakazteplic52
https://www.divephotoguide.com/user/zakazteplic52
https://taplink.cc/zakazteplic52
https://tepliczakaz.contently.com/
https://band.us/band/91334560
https://camp-fire.jp/profile/zakazteplic52
https://www.intensedebate.com/people/zakazteplic52
https://www.fundable.com/zakaz-teplic52
https://social.technet.microsoft.com/Profile/zakazteplic52
https://hub.docker.com/u/zakazteplic52
https://boosty.to/zakazteplic52
https://pinshape.com/users/2645113-zakaz-teplic52
https://gfycat.com/ru/@zakazteplic52
https://experiment.com/users/zzakazteplic52
https://www.freecodecamp.org/zakazteplic52
https://www.credly.com/users/zakaz-teplic52/badges
https://files.fm/tepliczakaz
https://disqus.com/by/zakazteplic52/about/
https://loop.frontiersin.org/people/2331390/bio
https://teletype.in/@zakazteplic52
https://pantip.com/profile/7577838
https://www.beatstars.com/tepliczakaz
https://www.metal-archives.com/users/zakazteplic52
https://app.roll20.net/users/12036402/zakaz-t
https://pbase.com/zakazteplic52/profile
Оформление лицензии на такси без ИП для собственного автомобиля
(Williamhub, 6. 6. 2023 21:10)
Работа водитель такси Москва
Как стать водителем в Яндекс Такси на своем авто? В статье вы узнаете все 5 полезных советов! Как подать заявку на подключение автомобиля к Яндекс.Такси.
https://car-family.ru/
Thank
(Gary_cert, 5. 6. 2023 14:16)
Мы предоставляем ремонт бытовой гаджетов на Питере за приемлемой стоимости. Команда бригада опытных мастеров поддержит клиентам оперативно и безупречно исправить всякую проблему с твоей бытовой аппаратурой. Мы с радостью осуществляем обширный ассортимент сервисов, от простого восстановления до сложной замены.
Наша команда применяем исключительно высококачественные качественные детали и материалы, соответственно вы все можете быть уверенными , что твоя аппаратура окажется восстановлена адекватно и будет работать долгие.
Наша мастера отправляются на ремонт в каждый округ СПб и ближайшего пригорода.
Наша команда намерены доставить высококачественное сервис и удовлетворенность покупателей, потому не стесняйтесь обращаться к нам, в случае вы имеете имеются запросы или недоумения по поводу восстановления вашей бытовой гаджетов.
https://dzen.webbuzzfeed.com/23503307/%D0%A0%D0%B5%D0%BC%D0%BE%D0%BD%D1%82-%D0%BA%D0%BE%D1%84%D0%B5%D0%BC%D0%B0%D1%88%D0%B8%D0%BD-%D0%B2-%D0%A1%D0%B0%D0%BD%D0%BA%D1%82-%D0%9F%D0%B5%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B1%D1%83%D1%80%D0%B3%D0%B5
https://dzen.bloggin-ads.com/41855469/%D0%A0%D0%B5%D0%BC%D0%BE%D0%BD%D1%82-%D0%B1%D1%8B%D1%82%D0%BE%D0%B2%D0%BE%D0%B9-%D1%82%D0%B5%D1%85%D0%BD%D0%B8%D0%BA%D0%B8-%D0%B2-%D0%A1%D0%B0%D0%BD%D0%BA%D1%82-%D0%9F%D0%B5%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B1%D1%83%D1%80%D0%B3%D0%B5
https://dzen.blogsmine.com/68794/%D1%80%D0%B5%D0%BC%D0%BE%D0%BD%D1%82-%D0%BC%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B7%D0%B8%D0%BB%D1%8C%D0%BD%D1%8B%D1%85-%D0%BA%D0%B0%D0%BC%D0%B5%D1%80-%D0%B2-%D0%A1%D0%B0%D0%BD%D0%BA%D1%82-%D0%9F%D0%B5%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B1%D1%83%D1%80%D0%B3%D0%B5
https://dzen.like-blogs.com/19562749/%D0%A0%D0%B5%D0%BC%D0%BE%D0%BD%D1%82-%D0%BA%D0%BE%D1%84%D0%B5%D0%BC%D0%B0%D1%88%D0%B8%D0%BD-%D0%B2-%D0%A1%D0%B0%D0%BD%D0%BA%D1%82-%D0%9F%D0%B5%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B1%D1%83%D1%80%D0%B3%D0%B5
https://www.vingle.net/posts/5857756
https://dzen.tinyblogging.com/%D0%A0%D0%B5%D0%BC%D0%BE%D0%BD%D1%82-%D1%82%D0%B5%D0%BB%D0%B5%D0%B2%D0%B8%D0%B7%D0%BE%D1%80%D0%BE%D0%B2-%D0%B2-%D0%A1%D0%B0%D0%BD%D0%BA%D1%82-%D0%9F%D0%B5%D1%82%D0%B5%D1%80%D0%B1%D1%83%D1%80%D0%B3%D0%B5-61930822
tryptomer832
(Tryptin-On, 5. 6. 2023 10:41)
Hey I know this is off topic but I was wondering if you knew of any widgets I could add to my blog that automatically tweet my newest twitter updates. I've been looking for a plug-in like this for quite some time and was hoping maybe you would have some experience with something like this. Please let me know if you run into anything. I truly enjoy reading your blog and I look forward to your new updates.
Купить Гашиш в Москве? САЙТ - WWW.KLAD.TODAY Гашиш Купить. САЙТ - WWW.KLAD.TODAY
(Erlindapibre, 5. 6. 2023 5:09)
Купить Гашиш в Москве? САЙТ - WWW.KLAD.TODAY Гашиш Купить. САЙТ - WWW.KLAD.TODAY
ССЫЛКА НА САЙТ - https://klad.today/
ССЫЛКА НА САЙТ - https://klad.today/
ССЫЛКА НА САЙТ - https://klad.today/
ССЫЛКА НА САЙТ - https://klad.today/
ССЫЛКА НА САЙТ - https://klad.today/
Купить Гашиш в Москве,
Сколько стоит Гашиш в Москве,
Как купить Гашиш в Москве,
Где купить Гашиш в Москве,
Купить Гашиш в Москве,
Сколько стоит КУРЕВО Гашиш в Москве,
Купить КУРЕВО Гашиш в Москве,
Цена на КУРЕВО Гашиш в Москве,
Купить героин в Москве,
Купить экстази в Москве,
Купить шишки в Москве,
Купить гашиш в Москве,
Купить мефедрон в Москве,
Купить экстази в Москве,
Купить МДМА в Москве,
Купить лсд в Москве,
Купить фен в Москве,
Купить скорость альфа в Москве,
Купить гидропонику в Москве,
Купить метамфетамин в Москве,
Купить эйфоретики в Москве,
Купить закладки в Москве,
Купить ГАШИШ закладкой в Москве
Sell Your Colorado House Quick Despite the State
(Scottcoila, 4. 6. 2023 10:18)
Hey guys,
I'm trying to sell my house fast in Colorado and I was wondering if anyone had any tips or suggestions on how to do it quickly and efficiently? I've already tried listing it on some popular real estate websites, but I haven't had much luck yet.
I'm thinking about working with a local real estate agent, but I'm not sure if that's the best option for me.
Any advice you have would be greatly appreciated.
Thanks in advance!
Упаковка рядом
(RobertCeand, 3. 6. 2023 9:36)
https://ambox.ru/meshki-polipropilenovye-ot-kompanii-upakovka-lux-vidy-i-sfery-ispolzovaniya/
Thank
(Tepi_Ma, 2. 6. 2023 22:44)
https://wakelet.com/@ZakazTeplic52885
https://vc.ru/u/1928652-zakaz-teplic52
Компания "Теплицы Нижний Новгород" предлагает высококачественные теплицы с прочным каркасом и дугами из высокопрочного поликарбоната. Размеры теплиц от производителя нашей компании варьируются от 2 до 5 метров. Оцинкованная дуга гарантирует необходимую прочность при сборке теплицы. Цены на нашу продукцию приемлемы и конкурентоспособны. У нас работают квалифицированные мастера, готовые собрать теплицу в сжатые сроки. Мы предлагаем доставку по Нижнему Новгороду и окружающим регионам по приемлемой цене. Постоянно действуют акции и специальные предложения для наших постоянных клиентов. Если Вы желаете заказать теплицу от производителя, просто позвоните нам по указанным контактам. Теплицы Нижний Новгород - это надежность и гарантия качества!
https://connect.garmin.com/modern/profile/85985f09-14bb-45fa-9c46-0127624d1904
https://solo.to/zakazteplic52
https://leetcode.com/tepliczakaz/
https://www.walkscore.com/people/127952196212/walk-score-user
https://profile.ameba.jp/ameba/zakazteplic52/
https://cs.astronomy.com/members/zakazteplic52/default.aspx
New moda
(AntonioBrurL, 31. 5. 2023 22:40)
https://twitter.com/peno_plast/status/594892884517728256
good
(Kazinoshord, 30. 5. 2023 19:52)
Online azartspelu portals ir kluvis par loti atraktivu izklaides veidu globala pasaule, tostarp ari Latvijas iedzivotajiem. Tas sniedz iespeju izbaudit speles un izmeginat https://s3.amazonaws.com/latvija/online-kazino.html savas spejas tiessaiste.
Online kazino piedava plasu spelu sortimentu, sakoties no klasiskajam galda spelem, piemeroti, ruletes galds un blackjack, lidz atskirigiem viensarmijas banditiem un video pokera spelem. Katram kazino dalibniekam ir iespeja, lai izveletos savo iecienito speli un bauditu saspringtu atmosferu, kas saistita ar naudas azartspelem. Ir ari atskirigas kazino speles pieejamas dazadu veidu deribu iespejas, kas dod iespeju pielagoties saviem speles priekslikumiem un risku pakapei.
Viena no uzsvertajam lietam par online kazino ir ta piedavatie premijas un darbibas. Lielaka dala online kazino piedava speletajiem dazadus bonusus, ka piemeru, iemaksas bonusus vai bezmaksas griezienus.
beautiful
(Kazinoshord, 30. 5. 2023 13:30)
Online glucksspiel ir kluvis par loti ietekmigu izklaides veidu visa pasaule, tostarp ari valsts robezas. Tas saistas ar iespeju izbaudit speles un testet https://s3.amazonaws.com/latvija/online-kazino.html savas spejas interneta.
Online kazino piedava plasu spelu izveli, sakoties no standarta galda spelem, piemeroti, ruletes galds un blackjack, lidz atskirigiem spelu automatiem un video pokera variantiem. Katram speletajam ir varbutiba, lai izveletos personigo iecienito speli un bauditu aizraujosu atmosferu, kas sajutama ar azartspelem. Ir ari akas kazino speles pieejamas atskirigas deribu iespejas, kas dod varbutibu pielagoties saviem izveles kriterijiem un drosibas limenim.
Viena no lieliskajam lietam par online kazino ir ta piedavatie premijas un darbibas. Lielaka dala online kazino izdod speletajiem diversus bonusus, piemeram, iemaksas bonusus vai bezmaksas griezienus.
Now passes the $150,000 airdrop
(Vicentemoido, 30. 5. 2023 0:18)
Now passes the $150,000 airdrop, which can end at any time. On this enter, do not leave it for later.
How do I start earning?
- In front of 500 CATLY press the Claim button.
- Then enter address of exchange Binance your USDT BEP20. When you take the address, select network BEP20.
- You will receive a small amount, wait until it arrives
- After that, enter the amount in the field, which you received
- That's all, you get 500 Catly for it, on this sum will be charged 3%, namely 15 Catly
- Withdraw to Binance from 30 Catly, they are converted to USDT and received by Binance.
Link to site - https://bit.ly/3q8cyv2
If you don't already have a Binance exchange, it's here - https://bit.ly/3osSDqc
q1zxc12X
New moda
(DavidInson, 29. 5. 2023 21:58)
https://smp-forum.ru/12-luchshih-sovetov-po-vyzhivaniyu-pri-pomoshhi-meshkov-dlya-musora/
New moda
(DavidInson, 29. 5. 2023 21:57)
https://smp-forum.ru/12-luchshih-sovetov-po-vyzhivaniyu-pri-pomoshhi-meshkov-dlya-musora/
New moda
(DavidInson, 29. 5. 2023 21:56)
https://smp-forum.ru/12-luchshih-sovetov-po-vyzhivaniyu-pri-pomoshhi-meshkov-dlya-musora/
New moda
(DavidInson, 29. 5. 2023 21:55)
https://smp-forum.ru/12-luchshih-sovetov-po-vyzhivaniyu-pri-pomoshhi-meshkov-dlya-musora/
New moda
(DavidInson, 29. 5. 2023 21:54)
https://smp-forum.ru/12-luchshih-sovetov-po-vyzhivaniyu-pri-pomoshhi-meshkov-dlya-musora/
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
gеt nоw # bіg bonus
(Petartag, 15. 6. 2023 14:21)