I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
|
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
|
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
|
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
|
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
|
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
|
XYY sy |
1,5 |
|
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
online casinos
online casino usa
Exploring the Miraculous of Dating: Connections, Advancement, and Discovery
(Cyharlesspuse, 14. 4. 2024 13:03)
Dating is a journey that encompasses the magic of good samaritan bearing, slighting growth, and far-out discoveries. It is a take care of through which individuals explore maudlin possibilities, getting to be acquainted with each other on a deeper level. Dating allows people to appropriate experiences, truck ideas, and create deep connections.
https://sexyfatmature.net/videos/51451/bbw-lovers-goddess-shar-shake-chug-and-belly-play/
In the monarchy of dating, a person encounters a diverse string of emotions. There's the exhilaration of convocation someone contemporary, the intuition of a beginning fixture, and the thrill of discovering stock interests and shared values. It is a time of vulnerability and self-discovery as individuals open themselves up to the potentiality of regard and companionship.
https://hentai0day.com/videos/1596/cartoon-porn-3d-porn/
Effective communication lies at the heart of dating, facilitating understanding and appropriateness between two people. It involves running listening, up symbol, and empathy, creating a gap representing veritable dialogue. Through communication, individuals can tour their compatibility, interchange thoughts and dreams, and assemble a groundwork of trust.
Windows 10 ISO Full Direct Link - HighSpeed
(Download Windows 10, 13. 4. 2024 12:51)
At present, there are still many people who prefer using Windows 10 Pro than upgrading to Windows 11. When an operating system already has everything necessary for one to work with, there is little to no reason for upgrade. As a matter of fact, some users consider Windows 10 Pro as the best version Microsoft has ever made and hence they are reluctant to replace it with the latest version.
Still, just like any other Windows versions ever released by Microsoft, Windows 10 Pro isn’t completely without problems. There have been a lot of issues and some of them have affected many users’s experiences significantly in using the operating system.
Microsoft Edge is the recommended browser in Windows 10 Pro offering a simple yet sleek interface alongside a slew of features that makes browsing the web feels much more convenient than when you use Internet Explorer. It is built based on the engine that powers Google Chrome browser and yet many users believe that Microsoft Edge is faster and lighter.
Despite being an older version, Windows 10 Pro has an arguably better Start Menu than Windows 11. It might look less beautiful but it is more functional. The fact that there are plenty tutorials on how to relocate the start menu to the left of the taskbar in Windows 11 is enough of a proof that new design isn’t always better than the old one, especially if the changes is too different from the past version.
There are at least two features in Windows 10 Pro that can save your eyes. The first one is dark theme that takes effect nearly everywhere including File Explorer. The second is Night Light. While the dark theme can protect your eyes from being blinded by the bright color of the light theme, the Night Light reduces the blue light which is believed to be a prominent factor in harming one’s sight.
Another mundane feature yet so helpful is the Quick Access section in File Explorer. The files that you were last working on are listed there automatically by Windows, so you can resume whatever you were working on quickly. However, while there are users who find this useful, there also others who considers it as a privacy risk and therefore disable it.
The clipboard manager, the one that has been revamped, is extremely useful in copying and pasting items. It stores the history of copied items. When you need to paste the same item, instead of searching it and copying it again, you can just pick it up from the history. Better yet, the clipboard content can be synced across your computers via the cloud. For users who copy paste text a lot, this feature alone would be a great boost to productivity.
Windows 10 Pro ISO Free Download
Windows 10 Pro is jam-packed with tons of features that are not only very useful but also easy to use. And there are still advanced features that power users can utilize to do certain tasks even more efficiently. All in all, Windows 10 Pro fits both casual and power users. You can click the link below to download Windows 10
Link :
Download Windows 10 : https://docste.com/download-windows-10-iso
Create USB Bootable : https://docste.com/create-bootable-usb-drive-of-windows-10-and-11-using-rufus
Get your bon...
(StevenRoona, 13. 4. 2024 9:11)
Top internet casіos!
Get Bigs bоnus for frее singup
https://tinyurl.com/3wr7weru
Get Big bon...
(StevenRoona, 12. 4. 2024 14:49)
Top online casіos!
Get Big bоnus for frее singup
https://tinyurl.com/yrnh2a3x
Men Dating Men: Celebrating Adulation and Joint
(Albertanodo, 12. 4. 2024 9:10)
Men dating men sample get a bang, connecting, and the stunner of relationships in their own incomparable way.
https://twinkporn.one/sites/thustin69/
In a world that embraces diversity and inclusivity, same-sex relationships have develop their place. Men who ancient men sail the joys and challenges of structure meaningful connections based on authenticity and mutual understanding. They hallow enjoyment from while overcoming societal expectations, stereotypes, and discrimination.
https://sexyfatmature.net/categories/japanese/
Communication and heartfelt intimacy pleasure a essential role in their relationships, fostering reliability and deepening their bond. As system progresses towards equality, it is noted to recognize and respect the angel shared between men dating men, embracing their together experiences and contributions to the tapestry of anthropoid connections.
How to get millions of emails and phone numbers for your business marketing needs
(SamuelSacle, 10. 4. 2024 19:22)Get millions prompt leads for your business to ignite your promotion. You can use the lists an unrestricted quantity of times. We have been delivering companies and market analysis firms with details since 2012. Lead Generation
Hidden Ad Monetization Gems: Discover What Successful Publishers Are Doing Differently
(Charlesgoody, 10. 4. 2024 15:28)
Hey, I visited your site and I think that your content is amazing! It is really engaging and original, you must have worked so hard to generate such a quality content.
My name is Natasha from ForeMedia and I help website owners with great websites to maximize the revenue they make from their website.
I would love to buy Ad Spaces on your website and pay you per each impression of the ads on your site. We are Google Ad Exchange Premium partners and we work with more than 100 Ad Network & thousands of premium direct advertisers who would LOVE to buy Ads directly from your site and we can guarantee to increase your revenue by at least 45% compared to other advertising solutions you are currently using.
You deserve to earn more for your content and maximize your earning potential and I will help you unlock that potential!
There is no cost, you can register to our monetization platform for free on this link: https://foremedia-ads.net
I will be available for you on the Live Chat if you need any help, or you can email me back to: natasha@foremedia-ads.net if you have any questions.
I have at least 17 Premium Advertisers that have asked me to approach you because they would like to advertise on your website on Premium eCPM <cost>per impressions] basis.
Have a good day & feel free to ping me for any question!
Click the link here for 1 minute registration to our platform <it>s free!]: https://foremedia-ads.net
ForeMedia - Earn Money With Your Website
https://foremedia-ads.net
What is includes the implementation?
(Muskbluek, 8. 4. 2024 22:19)
Hi all!
Ethereum introduced the concept of smart contracts, which are self-executing contracts with the terms of the agreement directly written into the code. These contracts automatically execute once the predetermined conditions are met, eliminating the need for intermediaries and ensuring trustless transactions. By utilizing Ethereum’s blockchain, smart contracts offer an unprecedented level of transparency, accountability, and efficiency in a wide range of sectors, including finance, supply chain management, and healthcare.
Link:https://ostrov-dety.ru or here https://bitcoinlove.fun/coin/snx-coin-grafik.html.
Hello
(Yanalfex, 8. 4. 2024 18:02)Hello. I'm interested in your proposal. call me +79219668577
Get Unlimited Storage, One time payment, Say Goodbye Dropbox, Google Drive, One Drive
(WaveCloud, 7. 4. 2024 2:09)
Hi
Have you ever been frustrated with Google Drive, Dropbox, and OneDrive? I know I have!
WaveCloud is here to save the day!
Well, say hello to WaveCloud! Say goodbye to monthly fees, and lots of them that add up fast. Get WaveCloud for a small one-time fee today and never pay again.
WaveCloud is a brand new "SSD Cloud" technology that lets you store and deliver all your videos, audios, images & media files at lightning-fast speed. Never again will you have to deal with buffering or slow downloads.
>Host your videos, audios, and images
>SSD Ultra-Fast Loading Speeds and ZERO downtime
>Store unlimited files without paying monthly
>Backup all your important files
>Complete data protection with FREE End-to-End SSL encryption
And you get to do that WITHOUT paying monthly for it....but that's only for the next Few DAYS, so you'll want to be quick!
Get it now before the offer ends: https://itme.xyz/WaveCloud
WaveCloud is the easiest way to store, backup, and serve all your personal and business files - photos, videos, documents & more - all in one place. And we will give you a discount of $5 on your purchase if you buy now.
>>>>>Remember: If you miss the Deal (Unlimited Cloud Storage for $23 - One Time Payment), You have to Pay $97/month.<<<<<
The Deal's actual price is $27, but when you use our link below, you will get an extra $5 off. That's cool, right? Use this Promo Code for an Extra $5 Off <WCLOUD>]
>>>>>Get it now before the offer ends: https://itme.xyz/WaveCloud <<<<<
(30 Days Money Back Guarantee)
Best Regards,
WaveCloud
Considerations To Know About Black Diamond Ring
(HaroldVek, 4. 4. 2024 16:54)
Watch ring Pear diamond solitaire engagement ring with fern element and star established diamonds in 18K rose gold
"This is quite top quality ring, it is gorgeous, it is precisely as described, it satisfied my expectation and then some, I'd a issue with shipping and delivery and he took treatment of it instantly.
Be the 1st to learn about interesting new designs, Particular occasions, retail store openings and much more. E mail
Selected kinds determine the overall silhouette and effect of the engagement ring, so consider time to think about if a solitaire, pavé, halo, or trilogy design will be the 1 for you personally. Ideal known for their brightness and brilliance, a round diamond is usually a time-honoured diamond shape for an engagement ring as its flexible round shape suits all styles and metals. Our designers attract creative inspiration from around to bring you a various range of platinum round diamond engagement rings, so take a look at our full choice of design variations beneath.
Normally a round fantastic Lower diamond might be dearer than an emerald Reduce because of the popularity and need of rounds as well as the amount of in the tough diamond is squandered during the slicing approach (about 40%).
This pendant is accessible in numerous unique full carat weights of side diamonds in addition to unique Middle stone measurements the pendant can maintain. Click on this link to view other variations obtainable for this pendant.
Similar to the love of your life, there is a diamond intended just for you. Regardless of whether purely natural or lab grown, meet up with yours in our unmatched curation of diamond rings for Females and Males.
https://vocal.media/authors/sanders-haas
Colour Options of Sapphire Engagement Rings The attraction of sapphire lies not only in its Affiliation While using the royalty as well as the aristocrats and also in its availability in many different shades. This magnificent gemstone is available in almost every shade of the rainbow from white to black covering the complete coloration wheel.
Scroll by means of to determine Each and every season’s drool-worthy sparklers, mainly because diamonds are permanently — whether or not not all couples are:
In regards to metals, you are able to choose from white, yellow and rose gold and silver and platinum. Want one thing unique and fashionable? We even have two-tone gold engagement rings for Gals.
Personalised promoting could be thought of a “sale” or “sharing” of information under California along with other state privateness rules, and you could have a suitable to opt out.
The worth for a wonderful Lower emerald cut diamond will probably change depending on the carat pounds, clarity quality and coloration quality.
Pricing is decided by real Expense and working expenses. Through the years We've got constructed interactions with the top diamond suppliers to secure the ideal choice and pricing. Adiamor believes in passing People price savings on to our customers. This tactic has labored for more than 20 years and we intend to continue offering premium luxurious items at the top price ranges within the sector. Shop Diamonds Exactly what is the differance involving platinum or white gold?
A 3-carat round diamond ring exudes luxury and extravagance, having a putting existence that highlights the Excellent brilliance from the round cut. Selecting this size requires a mindful assessment of components including color, clarity, and Slice to ensure that it complements the grandeur of your like Tale.
The best secure smartphones
(MarianFip, 4. 4. 2024 8:44)The best secure smartphones in 2024 - https://birka-online.com/
Best Online Slot Games
(NathanSpady, 4. 4. 2024 8:31)
Best online casinos in the US of 2024. We compare online casinos, bonuses & casino games so that you can play at the best casino online in the USA
https://is.gd/u5Hkob
Check out the best new casino sites for 2024 that are ranked according to their casino game variety, bonus ease, safety, and overall user experience
https://is.gd/u5Hkob
Sports forecast channel, everything is the same as others, only free https://tinyurl.com/yptttbz5
casino table games
(MeganTaf, 3. 4. 2024 16:01)
blackjack online casino
best casino online
naléhavě sem přijďte číst důležité zprávy https://aitt.md/en/
(MichaelSit, 2. 4. 2024 1:46)naléhavě sem přijďte číst důležité zprávy https://aitt.md/en/
Exploring the Magic of Dating: Connections, Broadening, and Discovery
(Cyharlesspuse, 1. 4. 2024 23:16)
Dating is a junket that encompasses the spell of good samaritan ally, slighting excrescence, and exciting discoveries. It is a take care of through which individuals traverse dreamt-up possibilities, getting to recall each other on a deeper level. Dating allows people to share experiences, market ideas, and design expressive connections.
https://hentai0day.com/videos/23095/love-bitch-hentai-uncensored-porn/
In the duchy of dating, undivided encounters a distinctive range of emotions. There's the exhilaration of convention someone modish, the anticipation of a first fixture, and the titillation of discovering common interests and shared values. It is a time of vulnerability and self-discovery as individuals open themselves up to the plausibility of inclination and companionship.
https://thetranny.com/videos/64566/cute-young-shemale/
Effective communication lies at the will of dating, facilitating understanding and appropriateness between two people. It involves active listening, honest symbol, and empathy, creating a range representing authentic dialogue. Thoroughly communication, individuals can tour their compatibility, transfer thoughts and dreams, and build a bottom of trust.
Men Dating Men: Celebrating Harmony and Pull
(Albertanodo, 1. 4. 2024 21:12)
Men dating men sample love, union, and the beauty of relationships in their own unique way.
https://zeenite.com/videos/136973/boruto-hanabi-hyuga-deep-creampie-hentai/
In a life that embraces diversity and inclusivity, same-sex relationships suffer with develop their place. Men who date men sail the joys and challenges of structure meaningful connections based on authenticity and complementary understanding. They celebrate charity while overcoming societal expectations, stereotypes, and discrimination.
https://gay0day.com/search/luke-wilder-mansurfer/
Communication and emotional intimacy pleasure a momentous part in their relationships, fostering trust and deepening their bond. As people progresses close to conformity, it is noted to acknowledge and compliments the friendship shared between men dating men, embracing their unequalled experiences and contributions to the tapestry of kind-hearted connections.
interesting for a very long time
(Esbesnase, 1. 4. 2024 16:12)Thanks, I've been looking for this for a long time
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57
online casino usa
(MeganTaf, 17. 4. 2024 16:13)