I. Genetické minimum - chromozómové choroby a ich diagnostika
Ďurovčíková Darina
Klinika lekárskej genetiky SZU a FNsP, Bratislava
Úvod
Genetické choroby vznikajú v dôsledku mutácii na úrovni génu, alebo väčšej časti genómu, v interakcii s exogénnymi faktormi. Výskyt geneticky podmienených patologických stavov ( tab.1), alebo predispozícia k nim sa podľa viacerých štatistík odhaduje na 12-15% (1,2).
Etiologickú rôznorodosť spôsobujú rôzne typy genetických defektov, detekcia ktorých si vyžaduje špecifické laboratórne metódy (tab.1). V ostatnom čase sme zaznamenali ich významný pokrok, týkajúci sa najmä rozvoja genetických diagnostických testov, ktoré majú priamy dopad na manažment komplexnej starostlivosti o pacientov a rizikových členov rodiny. Pre včasnú diagnostiku a prevenciu genetických ochorení je dôležité vzdelávanie a transfer poznatkov do praxe každého lekára. Potrebe začlenenia najnovších poznatkov z medicínskeho výskumu a genetiky do pregraduálneho a postgraduálneho vzdelávania sú venované osobitné príspevky na blížiacej sa konferencii AMEE (Association of Medical Education in Europe). Forsíruje sa dostupnosť vedomostí s cieľom rozpoznať genotypo-fenotypové korelácie najmä vo vzťahu k liečbe a celkovej zdravotnej starostlivosti (3). Iné asociácie a spoločnosti (ESHG, OECD) odporúčajú vzdelávanie v uvedených oblastiach vrátane genomiky a proteomiky zaradiť aj do mimoprofesného vzdelávania pracovníkov v zdravotníctve ako aj pre širokú laickú verejnosť. Primeraná úroveň vzdelania zbavuje neopodstatnených obáv z genetiky, ktorá je v 21.storočí neoddeliteľnou súčasťou liečebno-preventívnej starostlivosti.
S potešením možno konštatovať, že uvedené odporúčania u nás viac rokov akceptujeme. Otázky genetického testovania, algoritmy genetickej diagnostiky, správnej laboratórnej praxe, etiky a legislatívy v odbore sú náplňou pravidelných školiacich aktivít na SZU.
Zároveň sú pre nás ambíciou zaplniť priestor v tomto periodiku na pokračovanie, ktorého obsahom bude minimum genetických poznatkov. Prvú časť venujeme chromozómovým ochoreniam a prehľadu ich diagnostických metód.
I. Chromozómové choroby
Chromozómové anomálie pozorujeme ako zmeny na chromozómoch , ktoré môžu byť :
- vrodené (konštitučné)
- získané (v priebehu života napr. malígnym procesom v bunke).
Vrodené chromozómové anomálie spôsobujú zmenou počtu, alebo štruktúry chromozómov génovú nerovnováhu a upozornia na seba závažnou poruchou morfogenézy. Pre autozómové anomálie je typický výskyt VVCH spolu s mentálnou retardáciou (obr.1). Anomálie pohlavných chromozómov sprevádzajú poruchy rastu a somatosexuálneho vývinu a sú z klinického hľadiska menej závažné. Vyhľadávanie ich zvýšeného rizika sa uskutočňuje celoplošným prenatálnym biochemický skríningom ( sAFP a betaHCG ) u tehotných žien v rozmedzí 16-18 týždňa gravidity. Vrodené a získané chromozómové anomálie potvrdíme cytogenetickým vyšetrením pri ktorom sa stanoví karyotyp. Výskyt chromozómových chýb v populácii živorodených je cca 1% (2.4).
Diagnostické známky na klinickej úrovni
Na chromozómové ochorenia u novorodenca upozorňuje prítomnosť vrodených vývinových chýb (VVCH) , ktoré sú zastúpené v ich etiológii cca 5%. Signálmi pre chromozómovú anomáliu bývajú nevysvetliteľná polystigmatizácia, tonusové poruchy, rôzne patologické parametre zistené prenatálnym ultrazvukovým vyšetrením plodu ako sú: mikrocefalia, zhrubnutá nuchálna riasa, rastová retardácia a rôzne orgánové anomálie a iné. Neskôr to býva mentálna retardácia, zaostávanie rastu, pubertálneho vývinu, nástupu menštruácie a iné. V dospelosti sa konštitučná chromozómová anomália diagnostikuje skôr výnimočne. Ich záchyt pozorujeme pri vyšetrení párov pre poruchy fertility a reprodukcie v podobe anomálií pohlavných chromozómov, zriedkavých foriem malých gonozómových mozaík a vyvážených chromozómových prestávb.
Charakteristika a rozdelenie
Predstavujú odchylky od normálnej chromozómovej výbavy somatickej bunky, ktorá obsahuje 22 párov autozómov (1-22 ) a pár pohlavných chromozómov – gonozómov (XX, alebo XY). Najčastejšou príčinou vzniku aneuploidie je nondisjukcia, alebo patologické rozdelenie chromozómov v meióze, ktoré vzniká prezygoticky. Zriedkavo sú dôsledkom postzygotickej poruchy mitotického bunkového delenia. Tieto javy sú väčšinou náhodné, aj keď sa pripúšťa, že určité rodiny môžu mať sklon k nondisjuncii (asynchrónne delenie pri predčasnom delení centroméry). Len istá malá časť chromozómových anomáli vzniká zákonite v dôsledku vyvážených anomálií (prestavieb chromozómov), ktoré sa vyskytujú v populácii ich zdravých prenášačov s frekvenciou menej ako 0,2% (4)
Rozdelenie podľa (I a II) zohľadňuje typy chromozómov a konkrétne zmeny.
I. Rozdelenie podľa typu chromozómov
A./ AUTOZÓMOVÉ
B./ GONOZÓMOVÉ
II. Podľa typu zmien v počte a štruktúre chromozómov:
a/ numerické - odchýlky od normálneho počtu diploidnej sady chromozómov somatickej bunky. Môže ísť nadpočetný chromozóm z páru ( trizómia ), chýbajúci ( monozómia ), dva nadpočetné chromozómy z páru ( tetrazómia ) , násobky sady chromozómov ( triploidie ) a iné odchylky od normálneho počtu (aneuploidie ). Z autozómových anomálií k nim patrí trizómia 21 - Downov syndróm. Ide o najčastejšiu chromozómovú anomáliu, ktorej výskyt populácii je od od 1:750-1000 živorodených. Medzi ďaľšie zvyčajne neonatálne letálne trizómie patria Patauov ( trizómia 13 ) a Edwardsov ( trizómia 18 ) syndróm.
Trizómia môže byť voľná, náhodná forma s nízkym rizikom rekurencie, alebo translokačná. Táto mohla vzniknúť ako mutácia de novo, alebo dôsledkom vyváženej translokácie jedného z rodičov. Z gonozómových anomálií má najčastejší výskyt monozómia X, alebo Turnerov ( karyotyp 45,X0 ) a Klinefelterov syndróm ( karyotyp 47,XXY), ktoré sa zisťujú v čistej, alebo mozaikovej forme. Výskyt vybraných chromozómových anomálií je v tabuľke č.2.
b/ štruktúrové - charakterizuje zmena štruktúry chromozómu vizualizovateľné ako prestavby krátkeho (p) a / alebo dlhého ramienka (q) chromozómu. Patria sem chýbanie určitého úseku chromozómu (delécia), alebo zmnoženie (duplikácia) istého úseku chromozómu. Ďalej sú to premiestnenie časti chromozómu na iný (translokácia), alebo iné tvarové zmeny chromozómov ( prstencový chromozóm, izochromozóm). Príkladom autozómovej štruktúrovej anomálie je syndróm mačacieho plaču (Cri-de-Chat sy ), ktorý spôsobuje delécia úseku krátkeho ramienka chromozómu č.5 (obr.2) Zjednodušený zápis karyotypu u chlapca s týmto syndrómom je 46,XY, 5p-. Z gonozómových anomálií sa pomerne často vyskytuje prstencový chromozóm X - karyotyp 45,X r(X), alebo izochromozóm, ktorý sa u ženy manifestuje ako Turnerov syndróm (5). Submikroskopické zmeny, kryptické translokácie nie sú možné touto metódou obsiahnúť.
c/ mozaiky: predstavujú prítomnosť viacerých bunkových klonov s rozdielnou chromozómovou výbavou. Pozorujeme ich v bunkách ako rôzne chromozómové línie, nezriedka ako minoritné, s frekvenciou menšou ako 10%. Na ich detekciu je potrebné zhodnotiť väčšie množstvo mitotických figúr. Časté sú napríklad mozaikové formy Turnerovho syndrómu, Klinefelterovho syndrómu. U týchto pacientov teda nájdeme v bunkách karyotyp s normálnym a patologickým chromozómovým nálezom. Zápis karyotypu obsahuje viacero línii a začína sa zvyčajne najpočetnejšie zastúpenou. Mozaika Turnerovho syndrómu môže mať aj takýto nezvyčajný karyotyp ( 45,XO/46,XX/46,XY ). V tomto prípade prevažuje línia s chýbajúcim X chromozóm, prítomná je aj normálna a minoritná s prítomnosťou Y chromozómu. Existujú aj iné varianty s prstencovým, alebo s izochromozómom.
Genetické diagnostické testy
Chromozómové anomálie najčastejšie diagnostikujeme laboratórnymi technikami, ktoré poskytujú kompletnú analýzu karyotypu. V ostatnom čase sa klasické metódy identifikácie chromozómov dopĺňajú o nové zobrazovacie metódy, ktorými sa odhaľujú predtým nepoznané prestavby na submikroskopickej úrovni (5,6).
Klasická metóda cytogenetického vyšetrenia je založená na analýze metafázových chromozómov získaných mitotickým delením kultivovaných lymfocytoch, ktoré sa farbia konvenčne a prúžkovacími metódami (C, G, R, Q). Detekuje numerické a štruktúrové anomálie na úrovni do 550 bandov. Vyššiu rozlišovaciu schopnosť dosiahneme metódou HRT (High resolution method), kde sa hodnotia dlhšie prometafázické chromozómy. Vyšetrenie karyotypu touto metódou vyžaduje odbornú skúsenosť a pre jej náročnosť ju nahrádzajú iné modernejšie metódy farebnej cytogenetiky (6).
Klasická cytogenetika sa rutinne využíva v diagnostike konštitučných chromozómových anomálií u pacientov s vrodenými vývinovými chybami (VVCH), mentálnou retardáciou ( MR ), poruchami rastu a pohlavného vývinu, alebo pri opakovaných spontánnych potratov. V neposlednej rade aj v prenatálnej diagnostike u plodu, ktorá sa uskutočňuje po stanovení ich rizika klinickým genetikom. Gonozómové anomálie, najmä v nizkopercentnej mozaikovej forme (Turnerov, Klinefelterov syndróm) sa môžu výnimočne diagnostikovať až pri poruchách reprodukcie v dospelom veku. Klasická metóda umožní záchyt štruktúrových anomálií a mnohonásobných chromozómových prestávb, ktoré sú typické pre syndrómy chromozómovej instability s rizikom malignity. Príkladom sú Fanconiho anémia, Ataxia teleangiektázia, Nijmegenský syndróm a iné. Manifestujú sa zvýšenou lomivosťou chromozómov. Najčastejšie sa pri týchto syndrómov zistí instabilná chromozómová translokácia 7/14, spolu s inými štruktúrovými zmenami a figúrami ( gapy, breaky, triradiály, kvadruradiály), ktoré bývajú v rôznom percentuálnom zastúpení (obr.3).
Fluorescenčná in situ hybridizácia ( FISH ) metóda používa metódy molekulovej cytogenetiky. Umožní diagnostiku chromozómových prestávb na submikroskopickej úrovni ( < 800 bandov ), ktoré nie sú vizualizovateľné klasickou technikou . Ide najmä o mikrodelečné a mikroduplikačné syndrómy a pomáha tiež odhaliť nízkopercentné mozaiky. Princípom je detekcia signálov po hybridizácii pacientovej chromozómovej DNA so špecifickými sondami (centromerickými, celochromozómovým, alebo lokusovo špecifickými) použitými podľa potreby (obr.4 ). Centromerické sondy sa používajú na zisťovanie numerických chromozómových chýb s dôkazom prítomnosti centromér, telomerických sekvencií a obsahu heterochromatínu. Celochromozómové sondy hybridizujú so svojim homológom pozdĺž celého chromozómu. Sú vhodné na diagnostiku štruktúrových anomálií chromozómov ako sú translokácie, delécie, inverzie. Lokusovo špecifické, alebo génové sondy hybridizujú do oblasti hľadaných konkrétnych sekvencii. Tento typ sond, veľkosti cca 150 kb, sa využíva k diagnostike mikrodelečných syndrómov ako sú napríklad najznámejšie z nich ( Praderov-Williho, Angelmanov, Di-Georgov, Wiliamsov-Beuerenov). Výhodou tejto metódy je hodnotenie signálov na väčšom počte chromozómov aj bunkových jadier. Použitie FISH a iných DNA metód detekujúcich sekvencie v oblasti SRY chromozómu Y umožňuje pri mozaikových formách Turnerovho syndrómu vyhľadávať pacientky s rizikom gonadoblastómu.
Kombinácia klasických a molekulovo cytogenetických metód sa využíva v onkogenetike pri diagnostike a liečbe hemoblastóz, vrátane monitorovania reziduálnej choroby a postransplantačných stavoch. Chronickú myeloickú leukémiu potvrdzuje výskyt chromozómu Philadelphia, ktorý vzniká v dôsledku translokácie medzi dlhými ramenami
Iné modifikované techniky
CGH - Komparatívna genómová hybridizácia je založená na porovnávaní dvoch fluorescenčne značených vzoriek DNA ( referenčnej a pacientovej), ktoré hybridizujú s normálnymi metafázovými chromozómami. Pacientová testovaná DNA je značená zeleným flurochrómom a referenčná vzorka ( DNA od zdravého jedinca s normálnym karyotypom ) sa označuje červeným. V pomere 1:1 sa obidve nechajú hybridizovať na preparáte s normálnymi chromozómami. Nerovnováhu v testovanej vzorke zistíme vyhodnotením pomeru intenzity zelenej a červenej fluorescencie pomocou špeciálneho softwaru. Využíva sa v nádorovej cytogenetike na skrínovanie chromozómovej nerovnováhy. Metóda však presnejšiu identifikáciu prestavby neumožňuje.
Multicolor FISH- mnohonásobná farebná fluorescentná in situ hybridizácia K detekcii zmien sa používa zmes rozdielne značených sond 5 fluorochrómami a ich vzájomnou kombináciou, čím sa docieli rozlíšenie všetkých chromozómov. Na vyhodnotenie je potrebná digitálna zobrazovacia mikroskopia s filtrami, CCD kamera a počítačový software k analýze obrazu. Na základe fluorochrómovej kompozície sa každému chromozómu určí tzv.pseudofarba..Táto metóda sa používa na identifikáciu zložitejších translokácií a prestavieb medzi viacerými chromozómami. Neumožňuje detekciu vnútrochromozómových zmien typu inverzií a malých delécií.
SKY - spektrálne karyotypovanie je variantom mnohofarebnej FISH, každému chromozómu je tiež pridelená pseudofarba. Kombinuje snímanie obrazu trojakým filtrom CCD kamerou s Fourierovou spektroskopiou a príslušným počítačovým programom.
mBAND - metóda mnohonásobného pruhovania - je založená na podobnom princípe ako FISH. Podstatou m.-pruhovania je označenie jedného chromozómu viacerými značenými sondami. V kombinácii sa tiež používa 5 fluorochrómov. Každá sonda hybridizuje s inou časťou chromozómu. Na základe hybridizačných signálov dochádza k tvorbe priečnych farebných pruhov po celej dĺžke chromozómu.
Záver: Zlatým štandardom klinickej cytogenetiky je vyšetrenie karyotypu klasickou metódou. S pribúdajúcimi dôkazmi o výskyte submikroskopických chromozómových zmien, kryptických prestávb modernými laboratórnymi technikami sa zvyšuje pravdepodobnosť odhaliť kauzálnu súvislosť s etiologicky neobjasnenou mentálnou retardáciou a polystigmatizáciou.
Literatúra:
1. Smith, C. J., Donnai , D.: Human malformation. In: Emery and Rimon´s Principles and Practice of Medical Genetics. 3.vyd. New-York: Churchill Livingstone, 1998, s. 687 - 696.
2. Thompson and Thompsonová : Genetics in medicine, W.B.Saunders company, 6-th Ed., 2001, s.443.
3. Internetové adresy: www.amee.org
4. VOGEL, F., MOTULSKY, A.G. Human Genetics. 3. vyd .Berlin-Heidelberg: Springer - Verlag , 1997, s 370 -376 .
5. Izakovič V. a kolektív: Cytogenetika v klinickej endokrinológii., Osveta Martin, 1972, 320 s.
6. Černáková I., Ďurovčíková D., Brozmanová, M.: De novo tandem duplication 15q21-26 identified by FISH. Cytogenet.Cell. Genet.,Vol.85,1999, Suppl.1., s.144
Tab.1 Geneticky podmienené patologické stavy
Chromozómové ( 0,6 – 0,9 %)
Monogénové ( 0,8% )
AD, AR, X-viazané
Multifaktoriálne ( polygénne dedičné)
a/ izolované VVCH ( 3-5% )
b/ choroby dospelého veku ( 5% )
Genetické poruchy somatických buniek
Mitochondriálne dedičné
____________________________________________
Celkový výskyt v populácii živorodených : 12 -15%
Tab. 2 Populačná frekvencia chromozómových syndrómov
( na 1000 živorodených )
Trizómia 21 (Downov ) |
1,5 |
Trizómia 18 (Edwardsov ) |
0,12 |
Trizómia 13 (Patauov) |
0,07 |
47,XXY (Klinefelterov) |
1,5 |
45,X (Turnerov ) |
0,4 |
XYY sy |
1,5 |
XXX sy |
0,65 |
Komentáře
Přehled komentářů
Germay Latest Breaking News, Pictures, Videos, and Special Reports from Germay News Today. Germay Blogs, Comments and Archive News.
https://www.germaynewstoday.com/
don't think anything
(Esbesnase, 7. 3. 2024 1:35)Cool, I've been looking for this one for a long time
I’m a Capybara, a little creature that has gained love for its appearance and character traits!
(Capy8Hem, 6. 3. 2024 8:00)
Hello, World!
Hey there, mate! Greetings from your favorite surfing capybara!
How’s the surf today?
Ready to catch some gnarly waves together?
https://capybara444.wordpress.com
Good luck!
Increase your sales with Drop Dead Studio / Увеличьте свои продажи с Drop Dead Studio
(BryanAroup, 5. 3. 2024 16:08)
Hello!
We're Drop Dead Studio and our goal is to help companies achieve impressive sales results through automated marketing.
We use XRumer in conjunction with our extensive contact database to interact with potential clients through contact forms on their websites.
We also sell a premium database for XRumer, in which millions of contact links, links for posting and registrations are selected, where 100% of your active link is placed, which is good for the link juice of your site, as well as fresh databases for GSA Search Engine Ranker and XRumer.
We also sell the GSA Search Engine Ranker activation key, the price is 2 times cheaper than on the official website, only $65.
And it really works!
Here are some examples of the success of our clients:
- A real estate organization increased the number of leads by 50% in just 2 weeks.
- Online clothing store increased its sales by 20% in just 1 month.
- The fitness club attracted 100 new members in 3 months.
Want the same impressive results?
Here's what you need to do:
1) Purchase access to our contact database: https://xrumerbasee.ru/.
2) Get our instructions for action.
3) Enjoy the results!
We guarantee that you will be able to:
- Increase your number of potential customers.
- Increase sales.
- Attract new clients.
Don't miss the chance to make your business more successful!
Best regards, Drop Dead Studio
P.S. If you are reading this letter, it means it is really effective!
P.P.S. Take action now!
P.P.P.S Check out my website https://xrumerbasee.ru/gsa-search-engine-ranker-kupit/ , stop delaying the growth of sales of any product and the growth of any website!
Hurry up, quantity is limited! Good luck!
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Привет!
Мы — Drop Dead Studio, и наша цель — помочь компаниям добиться впечатляющих результатов продаж с помощью автоматизированного маркетинга.
Мы используем XRumer в сочетании с нашей обширной базой данных контактов для взаимодействия с потенциальными клиентами через контактные формы на их веб-сайтах.
Также мы продаем премиум базу данных для XRumer, в которой отбираются миллионы ссылок на контакты, ссылки для постинга и регистраций, где размещается 100% вашей активной ссылки, что хорошо для ссылочного сока вашего сайта. сайт, а также свежие базы данных для GSA Search Engine Ranker и XRumer.
Также мы продаем ключ активации GSA Search Engine Ranker, цена в 2 раза дешевле, чем на официальном сайте, всего $65.
И это действительно работает!
Вот несколько примеров успеха наших клиентов:
- Клиент, занимающийся недвижимостью, увеличил число потенциальных клиентов на 50 % всего за 2 недели.
- Магазин одежды увеличил продажи на 20% всего за 1 месяц.
- Фитнес-клуб привлек 100 новых членов за 3 месяца.
Хотите таких же впечатляющих результатов?
Вот что вам нужно сделать:
1) Приобретите доступ к нашей базе контактов: https://xrumerbasee.ru/.
2) Получите нашу инструкцию к действию.
3) Наслаждайтесь результатами!
Мы гарантируем, что вы сможете:
- Увеличьте количество потенциальных клиентов .
- Увеличить продажи.
- Повысить эффективность привлечения клиентов.
Не упустите шанс сделать свой бизнес успешнее!
С уважением, студия Drop Dead.
P.S. Если вы читаете это письмо, значит, оно действительно эффективно!
П.П.С. Примите меры сейчас!
P.P.P.S Пишите мне в телеграм https://t.me/DropDeadStudio, хватит задерживать рост продаж любого продукта и рост любого сайта!
Торопитесь, количество ограничено! Удачи!
Germay News Today
(MichaelAlits, 5. 3. 2024 15:53)
Germay Latest Breaking News, Pictures, Videos, and Special Reports from Germay News Today. Germay Blogs, Comments and Archive News.
https://www.germaynewstoday.com
Заказ отзывов у seo-ezoterica ru - удаление отзывов за деньги
(Brianeteby, 5. 3. 2024 7:36)Позвольте мне поделиться своим опытом работы с SEO-Ezoterica ru. В нашем бизнесе мы столкнулись с серьезной проблемой - негативными отзывами на одном из популярных сайтов. Эти отзывы серьезно подрывали доверие к нашему бренду и вредили нашему имиджу. Мы обратились за помощью к нескольким компаниям, но только SEO-Ezoterica ru проявила подход, который впечатлил нас. Они не просто предложили решение проблемы, но и провели глубокий анализ ситуации, предложив комплексную стратегию управления нашей онлайн-репутацией. Их команда профессионалов внимательно выслушала наши требования и обеспокоенности, что важно для нас, и предложила решение, которое превзошло наши ожидания. Результаты их работы превзошли все наши ожидания: негативные отзывы были удалены, а общий образ нашего бренда значительно улучшился. Они даже помогли нам разработать стратегию для предотвращения подобных ситуаций в будущем. В итоге, благодаря SEO-Ezoterica ru, мы снова уверены в себе и своем бизнесе, и можем сосредоточиться на его развитии, зная, что наша репутация в безопасных руках.
can I ask you something?
(Georgefus, 4. 3. 2024 18:32)
Federal Inmate Text Messaging
https://contactmeasap.com/blog/federal-inmate-textual-content-service/
https://contactmeasap.com/blog/17-indicators-youre-employed-with-key-word/
https://contactmeasap.com/blog/seventeen-signs-you-work-with-key-phrase/
https://contactmeasap.com/blog/federal-inmate-text-services/
https://contactmeasap.com/blog/17-symptoms-you-work-with-search-term/
10 востребованных профессий в Беларуси в 2024 году
(Carmenphony, 4. 3. 2024 15:06)
10 востребованных профессий в Беларуси в 2024 году
https://vitrini.by/
В быстро меняющемся мире, где технологический и экономический ландшафт развиваются с невероятной скоростью, рынок труда также претерпевает значительные изменения. Беларусь, страна с развитой промышленной базой, IT-сектором и сельским хозяйством, не является исключением. В 2024 году мы наблюдаем сдвиг в спросе на профессии, отражающий глобальные тенденции и особенности нашей экономики. Давайте рассмотрим десять профессий, которые будут наиболее востребованы в Беларуси в этот период.
в 2024 году рынок труда Беларуси продемонстрирует значительные изменения, определенные глобальными тенденциями и локальными особенностями экономики. Профессии в сферах здравоохранения, IT, зеленой энергетики, образования и других областях будут особенно востребованы, открывая новые возможности для специалистов. Адаптация к изменениям, непрерывное обучение и развитие новых навыков станут главными факторами успеха в будущем рынке труда.
way to recalled!
(MaxwellHet, 4. 3. 2024 14:53)
Has anyone apprehend this side jostle renting fling down trailers? It's easy on the eyes sweet. I am buying my word go harmonious next week!
Check into it in here:
https://ibit.ly/let-us-feature-your-business-233
Really moving! ?Brobdingnagian congratulations to everyone intricate; you're entirely crushing it!
Don't misconstrue away from on reading this
Заработок на копирайтинге
(RonaldITARA, 3. 3. 2024 22:20)Как стать копирайтером: https://vk.com/ylcontent
У нас вы можете заказать диплом университета без предоплаты и получить его с доставкой в любую точку России.
(DorothyUnupt, 3. 3. 2024 21:25)
Доброго!
Написание диплома - это настоящее испытание: срыв сроков, но в интернете я нашел способы улучшить продуктивность и продолжать работу.
Мы поможем вам купить диплом университета недорого, с доставкой в любой город России, оплата после получения.
https://paxtonaikjw.develop-blog.com/28017372/about-marketing
https://motorcycle-reviews84715.collectblogs.com/67911181/a-secret-weapon-for-marketing
Желаю всем отличных оценок!
куплю диплом цена
купить диплом в хасавюрте
купить диплом механика
купить диплом в уссурийске
купить диплом медбрата
купить диплом бакалавра
купить диплом в иваново
купить диплом в калининграде
купить диплом в барнауле
купить диплом маркетолога
Маг Роман Петрович (cmag666.ru) - приворот на любимого отзывы
(DavidPak, 3. 3. 2024 18:56)
Мой опыт с приворотом, могу оставить только хороший отзыв - приворот спб отзывы
Живу я в большом городе, и найти среди кучи «магов» хорошего, трудно. Намучилась я с этим очень. И как бывает, все решается на пьяную голову. Сидели с двоюродной сестрой, поведала ей свою проблему с мужем и о бесконечных поисках магов. Она очень удивилась, что я сразу не стала искать человека с Якутии или другого региона Дальнего востока – это можно сказать родина многих сильных шаманов и колдунов.
Порекомендовала мага, с которым сама работала. Поработала с ним и я.
Поэтому хотела бы написать отзыв о привороте на мужа, проведенном магом Романом Петровичем.
___________________________________________________________________________
Я хочу поделиться своим опытом использования услуг мага Романа Петровича с сайта https://cmag666.ru Ватсап 8 (984) 286-12-65
___________________________________________________________________________
Перед тем, как обратиться к нему, моя ситуация с мужем казалась мне безвыходной. Наш брак испытывал серьезные трудности, и наши отношения становились все более напряженными.
Мой муж, с которым мы прожили много лет, казался мне все более отстраненным и равнодушным. Он уходил в себя, избегал общения, а наши разговоры становились все реже и поверхностнее. Я испытывала огромную боль от того, что наша семья распадается, и что я теряю своего мужа. В итоге он еще и любовницу завел.
После долгих раздумий и поиска решения проблемы, я решила обратиться к магу Роману Петровичу за помощью.
Он провел для меня приворот на мужа – на все ушло 5 дней, и еще дал ряд простых рекомендаций, которым нужно было следовать до получения результата. Последовали дни ожидания
На 5 день после проведения приворота я почувствовала изменения в поведении мужа. Он стал проявлять больше внимания и заботы, мы снова начали общаться и находить общие интересы. Стали возвращаться чувства и заинтересованность мной как женщиной. Все быстро нормлизовалось в наших отношениях, с любовницей он порвал все контакты.
Сейчас, спустя несколько месяцев после проведения приворота, я вижу, что наш брак стал крепким, стабильным и счастливым, как и раньше! Мы с мужем снова чувствуем себя близкими и любящими людьми.
Я благодарна магу Роману Петровичу за его помощь и поддержку в трудный момент!
==============================================================================================================================================================================================
сайт ищут по тегам - отзывы по любовному привороту - последствии приворота отзывы - отзывы о привороте по интернету
отзывы тех кто сделал приворот - отзывы о приворотах на жену отзывы о приворотах самостоятельно
приворот на окурок
приворот в день обращения
сильные привороты по уфе
заговор приворот вернуть жену
настоящие маги которые помогают
речь ющенко по по вуду выплат детям
сделать приворот на фото
слелать приворот
услуги по черной магии
скупка нелеквидов
(Павел Кузнецов, 3. 3. 2024 12:52)
Добрый день!
Наша фирма ООО «ПТО ПРОМКОМПЛЕКТ» на постоянной основе закупает по высоким расценкам новое и Б/У оборудование:
• Невостребованные складские остатки, неликвиды;
• Промышленное оборудование;
• Станки;
• Буровое оборудование;
• Инструмент;
• Подшипники, запчасти, агрегаты, узлы, БеЛаз, ДЭК, ЭКГ, ДЗ98, МтБЛ,(у) (новое и б/у);
• Деловой металлопрокат, трубопроводную арматуру, трубу, и тд.;
• Электрооборудование, электродвигателя, генераторы (новые и б/у) и тд.;
• твердосплавы, ВК, ТК, долото, бур.головки и пр. (новое, б/у, лицензия);
• Трансформаторы, трансформаторное масло (новое и б/у);
• Радиодетали, АТС, платы, измерительные приборы производства СССР;
• Труба, трубопроводная арматура, труба нержавеющая, теплообменники, слюда;
• Б/У задвижки, редуктора, насосы;
• Картриджи для принтеров новые оригинал;
• Оргтехника для офисов и складов можно и б/у.
Полный пакет документов, лицензии, допуски.
Предоплата 100%, договора, вывоз ТМЦ за счет покупателя.
Предложения присылайте на ватсап
+7 (980) 525-83-55 (Ватсап), +7 (980) 393-70-02 (Ватсап)
или на почту a4443@yandex.ru
Моментальное рассмотрение и выезд к хранению ТМЦ.
buy bitcoin with google wallet
(metamask-MkCwuO, 3. 3. 2024 11:21)https://trafficstars-best.gitbook.io/ does cash app have savings account
Piata de imobiliare in Timisoara 2024
(Jamesduern, 3. 3. 2024 0:00)
Alegerea unei firme imobiliare este un pas crucial atunci când dore?ti sa vinzi o apartament. În Timi?oara, District Real Estate se distinge prin serviciile sa în domeniul imobiliar, oferind suport complet clien?ilor sai.
Când sco?i la vânzare o apartament, District Real Estate ofera evaluari realiste ale pre?ului, bazate pe dinamica pie?ei locale. Echipa utilizeaza strategii de marketing eficiente, inclusiv promovarea online, pentru a atrage poten?iali cumparatori.
Pentru cei care doresc sa cumpere, District Real Estate devine un partener de încredere, oferind acces la o varietate de proprieta?i. Agen?ii sai te ghideaza în selec?ia celei mai potrivite op?iuni, luând în considerare toate preferin?ele tale.
Trecerea prin procesul de cumparare sau vânzare pentru https://districtestate.ro - vila Timisoara poate fi complicata, dar cu District Real Estate, beneficiezi de sfaturi juridica, ajutor în finalizarea tranzac?iilor ?i asisten?a în securing finan?arii necesare. Astfel, fie ca e?ti în cautarea unei case noi sau dore?ti sa vinzi o proprietate, aceasta agen?ie î?i prezinta solu?ii personalizate.
În concluzie, colaborarea cu District Real Estate în Timi?oara î?i poate u?ura considerabil procesul de tranzac?ionare imobiliara, fie ca dore?ti sa te despar?i de o proprietate sau î?i dore?ti sa achizi?ionezi o noua vila. Prin serviciile sale, te asiguri ca prime?ti cel mai bun ajutor posibil pe parcursul întregului proces.Pentru a oferi un suport complet, District Real Estate în Timi?oara nu doar ca faciliteaza tranzac?iile, dar ?i îmbunata?e?te întregul proces de cumparare sau vânzare. Cu o în?elegere profunda a pie?ei imobiliare locale, agen?ia lucreaza sa identifice cele mai bune oportunita?i pentru clien?ii sai, fara a ?ine cont de complexitatea cerin?elor.
Punând în rela?ii de lunga durata cu clien?ii, District Real Estate asigura ca fiecare tranzac?ie este tratata cu maxima seriozitate ?i dedicare. Consultan?ii sai sunt mereu pregati?i sa raspunda întrebarilor tale, oferind sfaturi pertinente pentru a naviga cu succes prin pia?a imobiliara.
Cauta articolele relevante despre imobiliare : https://englande763xlw2.ziblogs.com/profile
https://benitoy825sxf3.bloggerswise.com/profile
Utilizând tehnologii de ultima ora ?i metode de marketing modernizate, District Real Estate spore?te vizibilitatea proprieta?ilor tale, atragând un numar mai mare de poten?iali cumparatori. De asemenea, analizeaza în mod regulat tendin?ele pie?ei pentru a prezenta cele mai bune pre?uri, asigurându-se ca prime?ti valoarea justa pentru proprietatea ta.
Prin colaborarea cu District Real Estate, beneficiezi de o experien?a lini?tita ?i eficienta, indiferent daca e?ti vânzator sau cumparator. Acest parteneriat î?i permite sa te concentrezi pe nevoile tale, în timp ce echipa se ocupa de toate aspectele juridice ?i administrative.
În final, alege District Real Estate pentru o colaborare transparenta ?i de succes, care transforma procesul de cumparare sau vânzare a unei proprieta?i într-o experien?a placuta. Cu ajutorul ?i expertiza sale, vei fi mereu un pas înainte în realizarea obiectivelor tale imobiliare în Timi?oara.
https://districtestate.ro/tip/apartamente/
Мой Отзывы - Маг Ангелина 89853905910 отзывы - проверенные маги красноярск
(StevenOrask, 2. 3. 2024 23:27)
настоящие маги отзывы - Маг Ангелина 89853905910
______________________________________________________
Маг Ангелина - настоящий профессионал своего дела! Я обратилась к ней с просьбой помочь мне в привлечении успеха в моем бизнесе. Она провела для меня ряд ритуалов и предложила несколько амулетов для усиления энергии. Уже через несколько недель после начала работы с ней, я заметила положительные изменения в своем бизнесе. Маг Ангелина очень профессиональна и дружелюбна. Я рекомендую ее всем, кто ищет помощи в области магии и энергетики.
магия приворотные слова на парня
как вернуть жену приворотом самому
как делать приворот чёрное венчание
приворот и фазы луны
может ли человек исчезнуть после приворота
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 | 86 | 87 | 88 | 89 | 90 | 91 | 92
Germay News Today
(Phillipinfiz, 7. 3. 2024 5:04)